人表皮生长因子受体(EGFR)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-1691人表皮生长因子受体(EGFR)ELISA试剂盒

　　以下是关于人表皮生长因子受体(EGFR)ELISA试剂盒的实验使用说明，综合了多个可靠来源的操作指南和技术要点‌：

　　一、实验原理

　　采用双抗体夹心法：将纯化的EGFR捕获抗体包被于微孔板形成固相抗体，依次加入样本、标准品和HRP标记的检测抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经洗涤后加入TMB底物显色，颜色深度与EGFR浓度呈正相关，最终在450nm波长下测定OD值‌。

　　二、试剂盒组成

　　预包被酶标板‌：96孔或48孔配置‌

　　标准品‌：冻干粉需用稀释液复溶(典型浓度800pg/ml或4,000fmol/L)‌

　　检测抗体‌：生物素标记的抗EGFR抗体‌

　　显色系统‌：TMB底物A/B、终止液‌

　　洗涤缓冲液‌：需按说明书稀释‌

　　三、样本处理

　　样本类型 处理方法

　　血清/血浆 2-8℃离心20分钟(1000g)，避免反复冻融‌

　　组织匀浆 按1:9重量比加入PBS匀浆，5000g离心5-10分钟‌

　　细胞培养上清 直接离心(1000g，20分钟)或-20℃保存‌

　　四、操作步骤

　　加样‌

　　空白孔加稀释液，标准品孔梯度稀释(建议双孔检测)，样本孔加50μl‌

　　37℃孵育40分钟‌

　　洗涤‌

　　使用1×洗涤液，每孔350μl，浸泡1-2分钟后拍干，重复4-6次‌

　　加检测抗体‌

　　每孔加100μl生物素化抗体工作液，37℃孵育30分钟‌

　　显色与终止‌

　　加入TMB底物避光反应15-20分钟，显蓝色后加终止液变黄色‌

　　五、关键参数

　　检测范围‌：3.9-250pg/mL(EGF)或156-10,000pg/mL(EGFR)‌

　　灵敏度‌：≤1.6pg/mL‌

　　重复性‌：板内/板间变异系数<10%‌

　　六、注意事项

　　所有液体组分使用前需充分混匀，避免泡沫‌

　　不同浓度样本需更换枪头防止交叉污染‌

　　显色时间需根据实际调整，底物变蓝即失效‌

　　实验废弃物应按生物危害物处理‌

　　注：以上资料仅供参考，如需具体品牌的操作视频或标准曲线建立方法，可参考以下补充说明‌。

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