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以下是关于人触珠蛋白相关蛋白(HPR)ELISA试剂盒的实验使用说明,综合整理自多份高可信度操作手册及技术文档:
BS-1737 人触珠蛋白相关蛋白(HPR)ELISA试剂盒
一、检测原理
采用双抗体夹心法:
抗HPR单抗预包被于酶标板,样本中的HPR与单抗结合。
加入生物素化抗HPR抗体形成复合物,洗涤后结合辣根过氧化物酶标记链霉亲和素。
加入TMB显色底物,OD450nm吸光度值与HPR浓度呈正比,通过标准曲线定量。
二、试剂盒组成
组分 规格(96T) 保存条件
预包被酶标板 8×12孔 4℃/-20℃干燥
冻干标准品 2支(2000pg/ml) -20℃
生物素化抗体 120μL 4℃(避光)
TMB显色液 A/B液各6mL 4℃(避光)
终止液(2M) 6mL 室温避光
20×浓缩洗涤液 50mL 室温
注:不同品牌组分可能略有差异,需核对实际包装。
三、样本处理
血清/血浆:
全血室温静置2小时或4℃过夜,1000×g离心20分钟取上清。
避免溶血或高血脂样本。
组织匀浆:
用预冷PBS(pH7.4)冲洗组织,按1:9(重量/体积)匀浆后离心取上清。
细胞培养上清:
1000×g离心20分钟去除碎片。
保存条件:
短期(1周内)可4℃保存,长期需分装冻存于-20℃或-80℃,避免反复冻融。
四、操作步骤
试剂准备:
标准品:用400μL蒸馏水复溶,梯度稀释(建议做复孔)。
洗涤液:20×浓缩液按1:20稀释。
加样与孵育:
每孔加入50μL标准品或样本,室温孵育2小时。
显色与终止:
加入TMB底物避光显色10-15分钟,终止后30分钟内检测OD值。
五、注意事项
避免酶标板底部接触,影响读数准确性。
不同批号试剂不可混用,未用完板条需密封防潮。
终止液含强酸,操作时需佩戴防护用具。
注:以上资料仅供参考,如需进一步技术细节或问题排查,可参考具体品牌说明书或联系供应商。
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