以下是关于‌人转铁蛋白受体(TFR/CD71) ELISA试剂盒‌的实验使用说明书综合指南，整合了多个高可信度来源的操作要点和注意事项‌：

　　BS-1497 人转铁蛋白受体(TFR/CD71)ELISA试剂盒

　　一、实验原理‌

　　采用双抗体夹心法：

　　包被抗体‌：微孔板预包被抗人TFR/CD71抗体‌。

　　结合反应‌：依次加入样本、标准品和HRP标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体"复合物‌。

　　显色检测‌：TMB底物在HRP催化下显色(蓝色→黄色)，颜色深度与TFR浓度正相关，450nm波长测OD值‌。

　　二、试剂盒组成‌

　　预包被微孔板

　　TFR标准品(浓度范围通常为15.63–1000 pg/mL)‌

　　HRP标记检测抗体、TMB底物、终止液

　　洗涤缓冲液(20×浓缩液需稀释)‌

　　封板膜(一次性使用)‌

　　三、样本处理‌

　　血清/血浆‌：离心(3000×g，10分钟)去除颗粒，避免溶血‌。

　　细胞上清/组织匀浆‌：离心(1000–3000×g，10分钟)取上清‌。

　　保存‌：分装后-20℃冻存，避免反复冻融‌。

　　四、操作步骤‌

　　平衡试剂‌：冷藏试剂需室温平衡15–30分钟‌。

　　加样‌：

　　标准品和样本建议做复孔‌。

　　高浓度样本需稀释(计算时乘以稀释倍数)‌。

　　孵育‌：37℃避光反应，严格计时(通常30–60分钟)‌。

　　洗涤‌：使用洗板机或手动洗板，拍干‌。

　　显色与终止‌：

　　加入TMB避光显色(10–15分钟)‌。

　　终止后30分钟内检测OD值‌。

　　五、注意事项‌

　　质量控制‌：每次实验需同步绘制标准曲线‌。

　　避免污染‌：

　　使用一次性枪头，不同批号试剂勿混用‌。

　　封板膜不可重复使用‌。

　　仪器校准‌：定期校验移液器精度(误差≤2%)‌。

　　安全处理‌：所有废弃物按生物危害物处置‌。

　　六、常见问题‌

　　洗涤液结晶‌：温水浴助溶，不影响效果‌。

　　显色异常‌：检查底物避光保存及HRP活性‌。

　　注：以上资料仅供参考，如需进一步技术支持，可联系供应商获取服务或实验指导‌。

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