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人γ氨基丁酸(GABA)ELISA试剂盒实验使用说明书
发布时间:2025/7/30浏览:12次
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  人γ氨基丁酸(GABA)ELISA试剂盒实验使用说明书

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  以下是‌人γ-氨基丁酸(GABA)ELISA试剂盒‌的实验使用说明,综合整理自不同厂商的试剂盒说明书及操作指南:

  一、实验原理‌

  竞争法‌:样本中的GABA与HRP标记的GABA抗原竞争结合包被在微孔板上的抗体,显色强度与GABA含量呈负相关‌。

  双抗体夹心法‌:包被抗体与样本中的GABA结合后,再加入酶标抗体形成复合物,显色强度与GABA浓度呈正相关‌。

  二、样本处理要求‌

  血清/血浆‌:离心(2000-3000转/分,20分钟)后取上清,避免溶血或脂血‌。

  组织样本‌:匀浆后离心取上清,建议用PBS(pH7.4)稀释‌。

  尿液/细胞培养上清‌:直接离心后检测,避免反复冻融‌。

  注意事项‌:含NaN3的样本会抑制HRP活性,需避免使用‌。

  三、操作步骤(以双抗体夹心法为例)‌

  加样‌:

  标准品孔加入梯度稀释的标准品(50μL),样本孔先加稀释液40μL,再加样本10μL‌。

  孵育‌:37℃温育60分钟,洗涤5次(每孔加满洗涤液,静置30秒后拍干)‌。

  加酶标抗体‌:每孔加入HRP标记抗体100μL,37℃孵育60分钟‌。

  显色‌:加入TMB底物A/B各50μL,37℃避光显色15分钟‌。

  终止与检测‌:加终止液50μL,15分钟内测定450nm处OD值‌。

  四、结果计算‌

  以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线,样本浓度通过曲线拟合计算‌。

  若样本OD值超出线性范围,需用稀释液稀释后重测‌。

  五、注意事项‌

  试剂盒需2-8℃保存,使用前室温平衡20分钟‌。

  浓缩洗涤液若有结晶,需水浴加热溶解后再稀释使用‌。

  不同批号试剂组分不可混用‌。

  注:以上资料仅供参考,如需具体的完整说明,可参考品牌供应商或咨询技术老师。

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