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以下是人抗着丝点抗体(ACA/CENP) ELISA试剂盒的实验使用说明书核心内容,综合整理自多个供应商的标准化操作流程:
BS-1458人抗着丝点抗体(ACA/CENP)ELISA试剂盒
一、实验原理
采用双抗体夹心法(固相ELISA),通过生物素标记的抗体与ACA/CENP结合,再经HRP标记的亲和素催化底物显色,颜色深度与样本中ACA/CENP浓度成正比。
二、试剂盒组成
组分 96T规格 48T规格 保存条件
酶标板 12孔×8条 6孔×8条 2~8℃
标准品(400ng/ml) 0.6ml 0.3ml 需稀释后使用
生物素标记抗体 6ml 3ml 即用型
HRP-亲和素 10ml 5ml 避光保存
底物A/B 各6ml 各3ml 避光(B液对光敏感)
终止液 6ml 3ml 腐蚀性,需密封
三、样本处理
血清/血浆:
室温凝固10-20分钟,离心(2000-3000rpm,20分钟)取上清,避免反复冻融。
抗凝剂推荐EDTA或肝素,避免溶血。
细胞上清/组织匀浆:离心去除颗粒物,稀释至线性范围内。
四、操作步骤
包被与孵育:
标准品梯度稀释后加入微孔板,每孔100μl,设空白对照(仅加稀释液)。
37℃孵育60分钟,洗涤3次(拍干,避免交叉污染)。
抗体反应:
加生物素标记抗体50μl,37℃孵育30分钟,洗涤。
加HRP-亲和素100μl,避光孵育30分钟。
显色与终止:
加TMB底物100μl,避光反应15-20分钟,显蓝色。
加终止液100μl,黄色为最终颜色,30分钟内测OD450nm(参考630nm扣除背景)。
五、注意事项
安全操作:
避免皮肤接触终止液和底物B,操作时佩戴手套。
使用一次性吸头,金属加样器可能干扰结果。
质量控制:
标准曲线R²应≥0.99,样本S/N值≥2.1判为阳性。
不同批次试剂不可混用。
六、技术支持
部分供应商提供免费代测服务及实验问题指导(如上海一研、森贝伽)。
完整英文说明书需联系供应商获取。
如需具体品牌试剂盒的差异说明或优化方案,可进一步提供供应商名称以便细化。
注:以上资料仅供参考,具体产品信息请咨询技术老师或品牌供应商。
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