大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-3008 大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒

　　以下是‌大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒‌的实验使用说明书综合整理：

　　一、实验原理‌

　　采用‌双抗体夹心法‌或‌固相夹心法‌ELISA技术。通过包被抗体捕获样本中的TNF-β，再与酶标抗体形成复合物，经TMB显色后，颜色深浅与TNF-β浓度成正比。

　　二、试剂盒组成‌

　　核心组分‌：

　　预包被微孔板(96孔)

　　标准品(浓度梯度：15.6~1000 pg/mL，冻干品需复溶)

　　酶标抗体(HRP标记)

　　显色底物(TMB A/B)

　　终止液(2N H₂SO₄)

　　浓缩洗涤液(20×~30×)

　　需自备器材‌：

　　酶标仪(450nm)、移液器(10~1000μL)

　　37℃恒温箱、离心机(2000~5000×g)

　　三、样本处理‌

　　血清/血浆‌：全血室温静置2小时后离心(1000×g，20分钟)，避免溶血或脂血。

　　组织匀浆‌：按1:9(重量:体积)加入PBS匀浆，离心取上清。

　　保存‌：短期存于4℃，长期需分装冻存于-20℃(避免反复冻融)。

　　四、操作步骤‌

　　试剂准备‌：

　　复温：所有试剂室温平衡30分钟。

　　稀释洗涤液(如20×→1×)。

　　标准品稀释‌：

　　按说明书梯度稀释(如1000→500→250 pg/mL)。

　　加样与温育‌：

　　加标准品/样本(100μL/孔)，37℃孵育90分钟。

　　洗涤3次(每孔加洗涤液静置1分钟后甩干)。

　　显色与检测‌：

　　加TMB底物(90μL/孔)，避光反应15分钟→终止液(50μL/孔)。

　　酶标仪读取OD450nm值。

　　五、注意事项‌

　　关键控制点‌：

　　移液精度误差≤2%，避免气泡干扰。

　　显色液需避光现配，终止液倾倒缓慢防溅。

　　数据计算‌：

　　以标准曲线拟合样本浓度(推荐四参数逻辑曲线)。

　　保存条件‌：

　　未开封试剂盒：2-8℃保存6个月;开封后板条需密封防潮。

　　六、常见问题‌

　　显色异常‌：检查底物是否过期或污染。

　　高背景值‌：洗涤不净或样本浓度过高(需稀释)。

　　注：以上资料仅供参考，如需具体品牌试剂盒的完整说明，可咨询技术老师或品牌供应商的详细文档。

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