人瘦素(LEP)ELISA试剂盒使用说明书

　　BS-0083人瘦素(LEP)ELISA试剂盒

　　以下是综合多个高可信度来源整理的人瘦素(LEP)ELISA试剂盒使用说明书，涵盖实验原理、操作步骤及关键注意事项：

　　一、实验原理‌

　　采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。纯化的抗LEP抗体包被微孔板，依次加入标准品/样本、生物素标记抗体及HRP标记亲和素，形成复合物。TMB显色后，颜色深浅与瘦素浓度呈正相关，通过450nm波长测定OD值计算浓度。

　　二、试剂盒组成‌

　　组分 规格/说明 保存条件

　　预包被微孔板 96孔 2-8℃

　　标准品 冻干粉(浓度梯度0.15-50ng/mL) -20℃

　　生物素标记抗体 100μL(1:100稀释) 2-8℃

　　HRP标记亲和素 100μL(1:100稀释) 2-8℃

　　显色剂A/B液 各6mL 避光2-8℃

　　终止液 6mL(2N H₂SO₄) 2-8℃

　　20×洗涤缓冲液 20mL 室温(结晶需水浴溶解)

　　三、样本处理‌

　　血清/血浆‌

　　室温凝固10-20分钟后离心(2000-3000×g，20分钟)，避免溶血。

　　血浆需EDTA/肝素抗凝，离心后取上清。

　　组织匀浆‌

　　按1:9(w/v)加入PBS匀浆，离心取上清。

　　细胞上清‌

　　直接离心(2000×g，10分钟)去除颗粒。

　　保存条件‌：-20℃分装冻存，避免反复冻融。

　　四、操作步骤‌

　　试剂平衡‌：从冰箱取出后室温平衡20分钟。

　　加样‌

　　标准品孔‌：加入50μL梯度稀释的标准品。

　　样本孔‌：加入10μL样本+40μL样本稀释液。

　　温育‌

　　37℃孵育60分钟，洗涤后加入生物素抗体，再孵育30分钟。

　　显色与终止‌

　　TMB显色15分钟，加终止液后15分钟内测OD值。

　　五、关键注意事项‌

　　洗涤‌：手工洗板需拍干，自动洗板机每孔加350μL洗涤液。

　　显色控制‌：避免显色时间过长导致背景升高。

　　仪器校准‌：使用前确认酶标仪波长准确性。

　　六、结果计算‌

　　以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制曲线，样本浓度通过曲线方程计算。若样本OD值超出范围，需用稀释液稀释后重测。

　　注：以上资料仅供参考，本试剂盒仅用于科研，不可用于临床诊断。

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