以下是关于人脂联素(ADP)ELISA试剂盒的实验使用说明书综合整理：

　　BS-1528人脂联素(ADP)ELISA试剂盒

　　一、实验原理

　　采用双抗体夹心法检测样本中ADP含量。通过抗-ADP抗体包被微孔板捕获ADP，再与HRP标记的ADP抗体结合形成复合物，经TMB显色后测定450nm吸光度(OD值)，颜色深浅与ADP浓度呈正相关。

　　二、试剂盒组成

　　组分 规格(96T) 保存条件

　　预包被酶标板 1×96孔 2-8℃干燥

　　标准品 0.5ml×1瓶(1350μg/L) 2-8℃冷藏

　　酶标试剂(HRP标记) 6ml×1瓶 2-8℃避光

　　显色剂A/B液 各6ml×1瓶 2-8℃避光

　　20×浓缩洗涤液 50ml×1瓶 2-8℃冷藏

　　终止液 6ml×1瓶 常温保存

　　三、样本处理要求

　　血清/血浆‌

　　室温凝固10-20分钟后离心(2000-3000rpm，20分钟)，避免溶血

　　血浆推荐使用EDTA或肝素抗凝

　　细胞培养上清‌

　　直接离心取上清，或PBS稀释细胞悬液后冻融裂解

　　组织样本‌

　　需用PBS匀浆后离心，分装保存于-20℃

　　注意事项‌

　　含NaN3的样本会HRP活性，需避免使用

　　反复冻融不超过3次

　　四、操作步骤(以96孔板为例)

　　标准品稀释‌

　　将1350μg/L标准品按梯度稀释(如：1350→675→337.5→168.75→84.38→42.19→21.09→0μg/L)

　　加样孵育‌

　　标准品孔/样本孔各加100μl，37℃孵育120分钟

　　洗涤‌

　　用1:20稀释的洗涤液洗板5次，每次静置10-20秒

　　加酶标试剂‌

　　每孔加HRP标记抗体50μl，37℃孵育60分钟

　　显色与终止‌

　　加TMB底物A/B液各50μl，避光反应15分钟后加终止液50μl

　　五、结果计算

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线

　　检测范围通常为21.09-1350μg/L，灵敏度可达0.01μg/ml

　　六、注意事项

　　试剂使用前需室温平衡30分钟，浓缩洗涤液结晶需37℃孵育15分钟

　　显色时间超过20分钟可能导致背景过高

　　不同批号试剂不可混用

　　注，以上资料仅供参考，如需具体品牌说明书，可参考本生、天正信达或分细生物的详细文档。

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