人肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒的实验使用说明书核心内容如下：

　　BS-0120人肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒

　　一、实验原理‌

　　采用‌双抗体夹心法‌检测TNF-β浓度：

　　包被抗体‌：微孔板预包被抗人TNF-β单克隆抗体。

　　抗原结合‌：样本或标准品中的TNF-β与固相抗体结合，形成复合物。

　　酶标抗体反应‌：加入HRP标记的二抗，与抗原结合形成“抗体-抗原-酶标抗体"复合物。

　　显色与定量‌：TMB底物显色(蓝色→黄色)，450nm测OD值，浓度与颜色深浅正相关。

　　二、试剂盒组成‌

　　预包被微孔板

　　标准品(如180、120、60、30、15 ng/L梯度)

　　HRP标记检测抗体

　　样本稀释液、洗涤液、显色液(TMB)、终止液

　　三、样本处理要求‌

　　样本类型 处理方法 保存条件

　　血清‌ 3000g离心10min，取上清 -20℃避免冻融

　　血浆‌ EDTA/肝素抗凝，3000g离心30min -20℃保存

　　细胞上清‌ 3000g离心10min去除颗粒 -20℃分装保存

　　注意‌：避免溶血、脂血或NaN3干扰。

　　四、操作步骤‌

　　标准品稀释‌：2倍梯度稀释(如180→15 ng/L)，每孔50μL。

　　加样‌：样本稀释5倍后加样(40μL稀释液+10μL样本)。

　　温育‌：37℃孵育30分钟。

　　洗涤‌：洗涤3-5次，去除未结合物质。

　　显色与终止‌：TMB避光显色15分钟，加终止液变黄。

　　五、结果计算‌

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线。

　　样本浓度通过曲线方程计算，灵敏度通常≤0.68 pg/mL。

　　六、注意事项‌

　　试剂保存‌：2-8℃避光，有效期6个月。

　　避免污染‌：移液器枪头需更换，避免交叉污染。

　　显色控制‌：显色时间过长可能导致假阳性。

　　注：以上资料仅供参考，如需进一步了解ELISA操作步骤或样本处理方法，可参考试剂盒说明书。

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