犬白细胞分化抗原6(CD6)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　一、实验原理

　　本试剂盒采用双抗体夹心法检测犬CD6抗原：

　　包被抗体：微孔板预包抗CD6单克隆抗体，特异性捕获样本中的CD6抗原。

　　生物素标记抗体：加入生物素标记的多克隆抗体，与已结合的CD6形成“夹心"结构。

　　酶联反应：通过HRP标记的链霉亲和素与生物素结合，催化底物TMB显色，吸光度(OD值)与CD6浓度成正比。

　　二、试剂与材料

　　试剂组分：

　　预包被微孔板(96T/48T)

　　CD6标准品(浓度梯度)

　　生物素化抗体、HRP-链霉亲和素

　　TMB底物液、终止液、洗涤液(20×浓缩) 。

　　仪器：酶标仪(450 nm)、微量移液器、恒温箱(37℃)、离心机。

　　三、操作步骤

　　样本处理：

　　血清/血浆：室温凝固后离心(2000×g，15分钟)，取上清。

　　细胞培养上清：直接离心去除颗粒物。

　　组织匀浆：加PBS匀浆后离心取上清。

　　检测流程：

　　加样：每孔加入100μL标准品或样本，37℃孵育1小时。

　　洗涤：弃液后，用洗涤液洗板3次，拍干。

　　加酶标抗体：加入100μL生物素化抗体，37℃孵育30分钟。

　　显色：加入TMB底物，避光反应15分钟，终止液终止反应。

　　结果计算：

　　以标准品浓度(pg/mL)为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线，样本浓度通过曲线方程计算。

　　四、注意事项

　　试剂保存：未开封试剂盒2-8℃保存，避免反复冻融;浓缩洗涤液需37℃溶解盐结晶.

　　干扰因素：避免样本溶血、高浓度脂血或反复冻融.

　　质量控制：每个样本设复孔，标准品CV值应<10%.

　　五、技术参数

　　灵敏度：检测限≤1.0 pg/mL。

　　线性范围：1.56–100 pg/mL .

　　注：以上资料仅供参考，具体其他信息请咨询技术老师或品牌供应商。

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