人CD14分子(CD14)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-9960 人CD14分子(CD14)ELISA试剂盒

　　试剂盒组成

　　预包被微孔板：96孔板，预包被抗CD14单克隆抗体(可拆卸式设计)

　　标准品：冻干重组CD14蛋白(浓度梯度：9.375-600ng/mL，需用标准品稀释液复溶)

　　检测抗体：生物素标记抗CD14多克隆抗体(100×浓缩液，需稀释后使用)

　　酶结合物：HRP标记链霉亲和素(100×浓缩液)

　　配套试剂：

　　TMB显色液(A/B液分装)

　　终止液(2M LS)

　　洗涤缓冲液(30×浓缩，需稀释)

　　样本稀释液(含1% BSA的PBS缓冲液)

　　样本处理要求

　　血清/血浆：EDTA抗凝，3000rpm离心10分钟，避免溶血;建议稀释倍数1:10-1:50

　　细胞上清：离心去除颗粒物，直接检测或-20℃分装保存(避免反复冻融)

　　组织匀浆：按1:9加入PBS(pH7.4)匀浆，离心取上清

　　实验步骤

　　标准品梯度稀释：用样本稀释液配制6个浓度梯度(最高浓度600ng/mL，9.375ng/mL)

　　加样孵育：

　　每孔加入100μL标准品/样本，37℃避光孵育90分钟

　　弃液后每孔加350μL洗涤缓冲液，重复洗涤5次

　　显色检测：

　　加入100μL生物素化抗体工作液，37℃孵育60分钟

　　洗涤后加入100μL酶结合物工作液，37℃孵育30分钟

　　加入TMB显色15分钟，终止液终止反应，450nm测OD值

　　数据分析

　　标准曲线：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，四参数拟合法绘制曲线

　　灵敏度：检测限3.3ng/mL，线性范围9.375-600ng/mL

　　注意事项

　　试剂盒保存：未开封时标准品-20℃保存，其他组分4℃或-20℃分装(TMB显色液需4℃避光)

　　避免使用含NaN3的样本，HRP活性会被yizhi

　　实验建议：同一批次完成检测，不同数据不可直接比较

　　注：以上资料仅供参考，如需产品具体资料请咨询技术老师或品牌供应商。

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