人白细胞分化抗原30(CD30)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-0017人白细胞分化抗原30(CD30)ELISA试剂盒

　　以下是人白细胞分化抗原30(CD30) ELISA试剂盒的规范使用说明，本生整合了多个品牌试剂盒的通用操作流程与注意事项：

　　一、试剂盒组成‌

　　核心组分‌

　　预包被抗CD30抗体的96孔酶标板(可拆分为48T/96T规格)‌

　　冻干CD30标准品(浓度范围：2.5–40 ng/L，需用标准品稀释液复溶)‌

　　生物素标记的抗CD30抗体(即用型)‌

　　HRP标记的亲和素(即用型)‌

　　TMB底物液(A液与B液需混合使用)及终止液(2N H₂SO₄)‌

　　辅助试剂‌

　　洗涤缓冲液(20×浓缩液，需按1:20稀释)‌

　　样本稀释液(用于血清/血浆预处理)‌

　　二、样本处理要求‌

　　采集与保存‌

　　血清/血浆‌：全血静置10-20分钟后离心(2000–3000 rpm，20分钟)，取上清分装于-20℃保存，避免反复冻融‌。

　　细胞上清/组织匀浆‌：离心去除颗粒物后检测，高浓度样本需稀释至标准曲线范围内‌。

　　注意事项‌

　　避免使用含NaN₃的保存液，以免HRP活性‌。

　　细菌污染的样本可能导致假阳性，需严格无菌操作‌。

　　三、实验步骤‌

　　标准品制备‌

　　冻干标准品按说明书复溶(如0.5mL样本稀释液溶解)，梯度稀释至5个浓度点(如40、20、10、5、2.5 ng/L)‌。

　　加样与孵育‌

　　每孔加入100μL标准品/样本，37℃孵育90分钟‌。

　　洗涤3次后，加入100μL生物素标记抗体，37℃孵育60分钟‌。

　　再次洗涤，加入100μL HRP-亲和素，37℃孵育30分钟‌。

　　显色与终止‌

　　每孔加入100μL TMB底物，避光显色15–20分钟(颜色由蓝转黄)‌。

　　加入50μL终止液，颜色转为黄色，10分钟内测定OD450nm值‌。

　　四、结果计算‌

　　以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，样本浓度通过曲线方程计算‌。

　　检测灵敏度通常≤1.0 ng/L，批内CV≤15%‌。

　　五、常见问题处理‌

　　问题‌ ‌可能原因‌ ‌解决方案‌

　　显色过弱 孵育时间不足/抗体失活 延长孵育时间或更换新鲜试剂‌

　　背景偏高 洗涤不充分/底物污染 增加洗涤次数或更换底物‌

　　标准曲线异常 标准品稀释错误 严格按梯度稀释并短暂离心混匀‌

　　六、注意事项‌

　　试剂盒仅限科研使用，不可用于临床诊断‌。

　　操作时避免使用金属器材接触酶标板，防止静电干扰‌。

　　未用完的酶标板需密封保存于2–8℃，避免受潮‌。

　　注：以上资料仅供参考，具体请咨询技术老师或品牌供应商。

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