人可溶性肿瘤坏死因子α受体(sTNFαR)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-0367人可溶性肿瘤坏死因子α受体(sTNFαR)ELISA试剂盒

　　一、实验原理

　　采用双抗体夹心法：

　　包被阶段：微孔板预包被抗人sTNFαR单克隆抗体(固相抗体)。

　　结合阶段：样本中sTNFαR抗原与固相抗体结合，后加入生物素标记的二抗形成“抗体-抗原-酶标抗体"复合物。

　　显色阶段：TMB底物经HRP催化显色，**终止液(2mol/L H₂SO₄)**终止反应并转为黄色，450nm测OD值。

　　二、试剂盒组成

　　组分  规格  储存条件

　　酶标包 被板96孔/48孔4℃避光

　　标准品 0.5ml×1瓶-20℃分装保存

　　终止液 6ml×1瓶2-8℃

　　生物素标记抗体 6ml×1瓶4℃避光

　　显色剂(A/B液) 各6ml4℃避光

　　三、样本处理规范

　　血清：全血室温凝固30min，2000×g离心20min，避免溶血。

　　血浆：肝素抗凝，1000×g离心30min，去除颗粒物。

　　细胞裂解液：PBS洗涤后裂解，14000×g离心10min取上清。

　　四、操作步骤

　　加样：标准品/样本50μL + 生物素抗体100μL，37℃孵育60min。

　　洗涤：洗板5次，拍干(避免残留)^^2^^。

　　显色：TMB避光孵育15min，终止液50μL/孔，立即测OD值。

　　五、数据分析

　　标准曲线：四参数拟合，样本OD值代入曲线计算浓度。

　　质控要求：空白孔OD值应<0.1，板内/板间CV<10%。

　　六、注意事项

　　终止液安全：含强酸，操作时佩戴防护装备。

　　时效性：加入终止液后需30分钟内检测，防止吸光度衰减。

　　干扰因素：避免NaN3、溶血或高脂样本。

　　注：以上资料仅供参考，不作为实验依据，如果其他具体信息请咨询技术老师或品牌供应商。

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