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兔子肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒实验使用说明书
BS-4142 兔子肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒
一、实验原理
本试剂盒采用双抗体夹心法测定兔血清、血浆等样本中TNF-α浓度。通过预包被TNF-α抗体的微孔板与样本中抗原结合,再与HRP标记的二抗形成复合物,经TMB底物显色后,通过450nm波长测定吸光度(OD值),标准曲线计算浓度。
二、试剂盒组成
组分规格(96T)储存条件
预包被微孔板1块(96孔)4℃(短期)/-20℃(长期)
标准品(TNF-α)1瓶(1.0mL)-20℃避光保存
HRP标记抗体1瓶(8.0mL)4℃避光
TMB底物液1瓶(6.0mL)4℃避光
终止液1瓶(6.0mL)室温
三、实验步骤
样本处理
血清/血浆:4℃静置2小时或过夜,1000×g离心20分钟,取上清分装保存(-20℃≤1个月,-80℃≤2个月)。
避免溶血或反复冻融。
检测流程
加样:标准品梯度稀释(1.37-1000pg/mL)及样本各100μL/孔,37℃孵育90分钟。
洗涤:PBST洗涤3次,每次拍干。
显色:加入TMB底物避光反应15分钟,终止液终止后30分钟内测OD值。
四、注意事项
试剂使用前需平衡至室温,不同批次不可混用。
酶标仪预热至450nm,建议双孔复测以减少误差。
显色液避免强光照射,终止后及时读数。
五、结果分析
以标准品浓度(pg/mL)为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线,样本浓度通过曲线拟合值乘以稀释倍数计算。
六、储存与有效期
未开封试剂盒:按标签温度保存(-20℃或4℃),有效期12个月。
已拆封微孔板:需干燥剂密封保存于-20℃,建议1个月内用完。
注:以上资料仅供参考,不作为实验依据,具体产品说明请咨询品牌供应商或技术老师。
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