微生物法尼基焦磷酸合酶(FPS)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-5186 微生物法尼基焦磷酸合酶(FPS)ELISA试剂盒

　　适用样本：微生物培养上清液、细胞裂解液‌

　　一、试剂盒组成‌

　　组分名称 规格(96T) 保存条件

　　预包被FPS抗体酶标板 8×12孔 4℃避光

　　FPS标准品(冻干粉) 2管(100 ng/mL) -20℃长期保存

　　生物素化检测抗体 120 μL -80℃避光

　　酶结合物(HRP标记) 12 mL 4℃避光

　　TMB显色底物(A/B液) 各6 mL 4℃避光

　　终止液(2M H₂SO₄) 12 mL 室温

　　20×浓缩洗涤液 60 mL 室温

　　二、实验流程‌

　　标本制备‌

　　微生物上清液：4℃、3000×g离心10分钟，取上清检测‌。

　　细胞裂解液：加入RIPA裂解液，冰上裂解30分钟后离心取上清。

　　试剂准备‌

　　洗涤液：1份浓缩液+19份蒸馏水稀释‌。

　　标准品梯度：用标准品稀释液配制0.156-10 ng/mL系列浓度‌。

　　检测步骤‌

　　加样‌：每孔加入100μL标准品/样本，37℃孵育90分钟。

　　洗涤‌：洗板3次，每次浸泡1分钟‌。

　　加抗体‌：每孔加入100μL生物素化抗体，37℃孵育60分钟。

　　加酶结合物‌：每孔加入100μL HRP标记物，37℃避光孵育30分钟。

　　显色‌：每孔加入90μL TMB底物，避光反应15分钟‌。

　　终止‌：每孔加入50μL终止液，振荡混匀。

　　结果分析‌

　　酶标仪450nm读取OD值，标准曲线拟合计算样本浓度‌。

　　三、注意事项‌

　　避免反复冻融样本，分装后-80℃保存‌。

　　显色反应需避光，终止后30分钟内读数‌。

　　本试剂盒最小检测限：0.05 ng/mL(参考标准曲线)‌。

　　四、常见问题‌

　　高背景值‌：洗涤不净或孵育时间过长。

　　标准曲线异常‌：标准品稀释误差或板孔污染。

　　注：以上资料仅供参考，不作为实验依据，具体产品说明请咨询品牌供应商或技术老师。

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