植物达玛烷二醇合酶(DS)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-258251-A 植物达玛烷二醇合酶(DS)ELISA检测试剂盒

　　BS-258251-B 植物达玛烷二醇合酶(DS)ELISA检测试剂盒

　　一、实验原理

　　植物达玛烷二醇合酶(DS)ELISA试剂盒采用双抗体夹心法，其核心步骤包括：

　　抗体包被：抗DS单克隆抗体预包被于96孔微孔板，形成固相捕获层。

　　抗原结合：样本或标准品中的DS与包被抗体特异性结合。

　　酶联检测：加入HRP标记的二抗，形成“抗体-抗原-酶标抗体"复合物。

　　显色定量：TMB底物催化显色，终止液作用后于450nm测定吸光度，浓度与OD值正相关。

　　二、试剂盒组成

　　组分名称规格/浓度保存条件

　　预包被微孔板96孔×1块2-8℃(干燥)

　　DS标准品(冻干)2瓶(0.5-100ng/mL)-20℃(长期)

　　生物素标记抗体120μL(1:100)-20℃(避光)

　　HRP-链霉亲和素120μL(1:100)-20℃(避光)

　　TMB底物溶液10mL2-8℃(避光)

　　终止液(2M H₂SO₄)10mL室温

　　注：所有试剂使用前需平衡至室温(20-30min) 。

　　三、实验步骤

　　样品处理

　　植物组织样本需研磨后提取总蛋白，离心取上清，用样本稀释液稀释至推荐浓度。

　　加样与孵育

　　每孔加入100μL标准品/样本，37℃孵育90min。

　　洗涤3次(每次200μL洗涤液，静置30s)。

　　检测与显色

　　加入100μL生物素标记抗体，37℃孵育60min。

　　洗涤后加入100μL HRP-链霉亲和素，避光孵育30min。

　　加入90μL TMB底物，避光显色15min，终止后10min内读数。

　　四、数据分析

　　标准曲线：以标准品浓度(ng/mL)为横坐标，OD450值为纵坐标，拟合四参数逻辑曲线。

　　样本计算：根据曲线方程计算待测样本浓度，建议复孔取平均值。

　　五、注意事项

　　灵敏度：检测范围0.5-100ng/mL，板内/板间变异系数<8%。

　　干扰因素：避免样本反复冻融或溶血，高脂样本需离心处理。

　　有效期：试剂盒自生产日起6个月内使用，部分组分需-20℃保存。

　　六、常见问题

　　问题现象可能原因解决方案

　　标准曲线线性差标准品复溶不充分离心后静置10min

　　显色过浅孵育时间不足延长显色至20min

　　背景值高洗涤不增加洗涤次数至5次

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。 Elisa试剂盒

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