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大鼠血管紧张素1型受体(AT1)ELISA试剂盒实验原理
大鼠AT1受体ELISA试剂盒基于双抗体夹心法(Sandwich ELISA)原理,通过特异性抗体捕获目标蛋白并定量检测其浓度。
1. 核心步骤
包被抗体固定:微孔板预包被抗大鼠AT1受体的单克隆抗体,形成固相捕获层。
抗原-抗体结合:样本(如大鼠血清、组织匀浆)中的AT1受体与包被抗体结合,形成“抗体-抗原"复合物。
酶标二抗反应:加入生物素标记的二抗(如抗AT1受体多抗),与抗原结合后形成“抗体-抗原-酶标抗体"复合物。
显色检测:加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素(SABC)和底物(TMB),酶催化反应
生成蓝色产物,终止后变黄色,450nm测吸光度(OD值)。
2. 定量分析
标准曲线法:通过已知浓度的AT1受体标准品建立OD值与浓度的线性关系,样本浓度通过曲线拟合计算。
灵敏度与范围:典型检测范围为3.12-200 ng/mL,适用于大鼠样本中AT1受体的高灵敏度检测。
3. 技术特点
特异性:抗体对AT1受体具有高亲和力,避免与其他血管紧张素受体(如AT2)交叉反应。
信号放大:生物素-亲和素系统增强信号,提高检测灵敏度。
4. 应用场景
心血管研究:分析AT1受体在高血压、心肌肥厚等疾病模型中的表达变化。
药物筛选:评估AT1受体拮抗剂的药效。
5. 注意事项
样本处理:避免反复冻融,血清/血浆需离心去除颗粒物。
干扰因素:高脂或溶血样本可能影响结果,需预处理。
注:以上仅供参考,科研使用,不作为实际数据,实验需严格遵循说明或咨询技术老师。
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