大鼠Ki-67蛋白(Ki67P)ELISA试剂盒实验原理

　　大鼠Ki-67蛋白(Ki67P)ELISA试剂盒的实验原理主要基于‌双抗体夹心法‌，通过特异性抗体捕获目标蛋白并显色定量。以下是详细解析：

　　一、核心检测原理

　　抗体包被‌

　　试剂盒预包被抗Ki-67蛋白的单克隆抗体于酶标板微孔中，形成固相捕获层‌。

　　抗原-抗体结合‌

　　样本或标准品中的Ki-67蛋白与包被抗体特异性结合，形成“抗体-抗原"复合物‌。

　　信号放大‌

　　加入生物素标记的二抗(抗Ki-67多克隆抗体)，与已结合的抗原形成“抗体-抗原-二抗"复合物‌。

　　通过链霉亲和素-生物素-过氧化物酶(SA-ABC)系统进一步放大信号‌。

　　显色与定量‌

　　加入TMB显色底物后，酶催化反应生成蓝色产物，终止液变黄，在450nm波长下检测吸光度(OD值)，Ki-67浓度与OD值呈正比‌。

　　二、关键组分与流程

　　试剂盒组分‌：包被抗体、生物素化二抗、SA-ABC复合物、TMB底物、终止液等‌。

　　操作步骤‌：

　　样本稀释与加样

　　37℃孵育(通常1小时)

　　洗涤去除未结合物质

　　加入二抗与SA-ABC复合物

　　显色反应后终止并读数

　　三、技术特点

　　高特异性‌：双抗体夹心法可减少交叉反应，提高检测准确性‌。

　　灵敏度‌：检测范围通常为0.312-20ng/mL，适用于低丰度蛋白检测‌。

　　标准化‌：需通过标准曲线计算样本浓度，确保结果可比性‌。

　　四、注意事项

　　样本处理‌：避免反复冻融，建议使用新鲜组织或血清样本‌。

　　干扰因素‌：高浓度内源性生物素或异嗜性抗体可能影响结果，需通过稀释或阻断剂处理‌。

　　注：仅供科研使用，以上资料供参考，如需具体产品说明请咨询技术老师或品牌供应商。

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