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小鼠α谷胱甘肽S转移酶(α-GST)ELISA试剂盒实验说明书
本试剂盒采用双抗体夹心法检测小鼠α-GST水平。预包被抗体的微孔板捕获样本中的α-GST,加入生物素标记的二抗形成复合物,再通过SABC-辣根过氧化物酶系统显色。显色强度与α-GST浓度成正比,450nm波长下测定OD值,通过标准曲线计算样本浓度。
二、试剂盒组成
组分48T规格96T规格保存条件
预包被酶标板8×6条8×12条2-8℃密封
标准品6管(0-24 U/L)6管(0-24 U/L)2-8℃
生物素化检测抗体60μL(100×)120μL(100×)-20℃
TMB显色液各3mL(A/B液)各6mL(A/B液)避光
终止液6mL12mL室温
20×浓缩洗涤液30mL60mL室温
三、实验步骤
样本处理
血清/血浆:采集后离心(3000rpm, 10min),避免溶血,2-8℃保存48小时或-80℃长期保存。
组织匀浆:按0.1g组织加1mL PBS比例冰浴匀浆,离心取上清,稀释50倍后检测。
检测流程
加样:每孔加入100μL标准品/样本,37℃孵育90分钟。
洗涤:弃液后拍干,每孔加洗涤液200μL,重复3次。
显色:加入100μL酶标抗体,37℃孵育30分钟,加TMB底物避光反应15分钟。
终止:每孔加50μL终止液,30分钟内测定OD值。
四、数据分析
标准曲线绘制:以标准品浓度(U/L)为横坐标,OD值为纵坐标拟合四参数曲线。
样本计算:根据标准曲线公式计算α-GST浓度,组织样本需乘以稀释倍数(如50倍)。
五、注意事项
样本要求:避免反复冻融,高脂样本需离心去除悬浮物。
温度控制:反应全程保持37℃,显色避光防淬灭。
安全操作:TMB底物具腐蚀性,需佩戴手套操作。
数据验证:建议设置复孔,OD值超出标准曲线范围时需稀释重测。
注意:以上仅供参考,不作为实际数据,实验需严格遵循说明或咨询技术老师。
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