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小鼠α谷胱甘肽S转移酶(α-GST)ELISA试剂盒实验说明书
发布时间:2025/9/30浏览:33次
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  小鼠α谷胱甘肽S转移酶(α-GST)ELISA试剂盒实验说明书

  本试剂盒采用双抗体夹心法检测小鼠α-GST水平。预包被抗体的微孔板捕获样本中的α-GST,加入生物素标记的二抗形成复合物,再通过SABC-辣根过氧化物酶系统显色。显色强度与α-GST浓度成正比,450nm波长下测定OD值,通过标准曲线计算样本浓度。

  二、试剂盒组成

  组分48T规格96T规格保存条件

  预包被酶标板8×6条8×12条2-8℃密封

  标准品6管(0-24 U/L)6管(0-24 U/L)2-8℃

  生物素化检测抗体60μL(100×)120μL(100×)-20℃

  TMB显色液各3mL(A/B液)各6mL(A/B液)避光

  终止液6mL12mL室温

  20×浓缩洗涤液30mL60mL室温

  三、实验步骤

  样本处理

  血清/血浆:采集后离心(3000rpm, 10min),避免溶血,2-8℃保存48小时或-80℃长期保存。

  组织匀浆:按0.1g组织加1mL PBS比例冰浴匀浆,离心取上清,稀释50倍后检测。

  检测流程

  加样:每孔加入100μL标准品/样本,37℃孵育90分钟。

  洗涤:弃液后拍干,每孔加洗涤液200μL,重复3次。

  显色:加入100μL酶标抗体,37℃孵育30分钟,加TMB底物避光反应15分钟。

  终止:每孔加50μL终止液,30分钟内测定OD值。

  四、数据分析

  标准曲线绘制:以标准品浓度(U/L)为横坐标,OD值为纵坐标拟合四参数曲线。

  样本计算:根据标准曲线公式计算α-GST浓度,组织样本需乘以稀释倍数(如50倍)。

  五、注意事项

  样本要求:避免反复冻融,高脂样本需离心去除悬浮物。

  温度控制:反应全程保持37℃,显色避光防淬灭。

  安全操作:TMB底物具腐蚀性,需佩戴手套操作。

  数据验证:建议设置复孔,OD值超出标准曲线范围时需稀释重测。

  注意:以上仅供参考,不作为实际数据,实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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