小鼠丙氨酸氨基转移酶(ALT)ELISA试剂盒实验说明书

　　BS-2260小鼠丙氨酸氨基转移酶(ALT)ELISA试剂盒

　　一、实验原理

　　本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法，通过特异性抗体捕获小鼠血清/血浆中的ALT，结合酶标二抗显色反应，通过吸光度值定量检测ALT活性。检测范围4.687-300U/L，灵敏度达1.17U/L 。

　　二、试剂组成

　　预包被微孔板：ALT抗体包被(96孔/板)

　　标准品：6瓶(0-100U/mL梯0度浓度)

　　酶标二抗：净(6mL)

　　底物液：TMB显色液(A/B各6mL)

　　终止液：2Mliusuan(6mL)

　　浓缩洗涤液：20×Tween-20缓冲液(20mL)

　　三、操作步骤

　　1. 样本准备

　　采集小鼠全血至无内毒素试管，离心(3000rpm,10min)分离血清/血浆。

　　避免溶血、脂血样本，短期保存(2-8℃≤48h)，长期需-80℃冻存(避免反复冻融)。

　　2. 检测流程

　　步骤操作温度/时间

　　1、标准品/样本各100μL加至对应孔室温

　　2、加入酶标二抗50μL，封板避光孵育37℃, 60min

　　3、洗涤液洗板3次(每次浸泡1min)-

　　4、加入底物液A/B各50μL37℃避光, 15min

　　5、加入终止液50μL，立即测450nm吸光度-

　　四、注意事项

　　试剂保存：未开封试剂2-8℃避光保存(有效期6个月)，开封后R1/R2需28天内用完。

　　操作规范：

　　移液器吸头不可混用，避免交叉污染。

　　洗涤需净，避免残留气泡。

　　安全防护：处理样本时需戴手套，废弃物按生物危害物处理。

　　五、结果计算

　　绘制标准曲线(浓度-OD值)，拟合线性方程。

　　样本ALT活性(U/L)=(样本OD值-空白OD值)/标准曲线斜率。

　　六、常见问题

　　高背景值：可能因洗涤不净或底物曝光时间过长。

　　线性不佳：检查标准品稀释梯度或孵育温度一致性。

　　注意：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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