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小鼠(SULT)ELISA检测试剂盒技术说明书
BS-9421小鼠(SULT)ELISA试剂盒
一、产品概述
本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA),专用于定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中硫酸转移酶(SULT)的活性水平。仅供科研使用,不可用于临床诊断。
二、实验原理
双抗体夹心法:微孔板预包抗小鼠SULT捕获抗体,样本中SULT与其结合后,加入生物素标记的检测抗体形成“抗体-抗原-抗体"复合物。
酶联显色:加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素,催化底物TMB显色,颜色深浅与SULT浓度呈正相关。
定量检测:酶标仪450nm波长测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样本浓度。
三、试剂盒组成
组分 规格(48孔/96孔) 保存条件
酶标包被板 1×48/1×96 2–8℃
标准品(80U/L) 0.3ml×6管 2–8℃
酶标试剂(HRP标记) 5ml/10ml 2–8℃
显色剂A液 3ml/6ml 2–8℃
显色剂B液 3ml/6ml 2–8℃
终止液 3ml/6ml 2–8℃
浓缩洗涤液(20×) 15ml/25ml 2–8℃
封板膜、密封袋 2片/1个 室温
四、样本处理
血清/血浆:
室温静置10–20分钟,2000–3000转/分离心20分钟,取上清液。
避免反复冻融,建议分装后-80℃保存。
组织匀浆:
组织加入生理盐水捣碎,1000×g离心33分钟,取上清液。
细胞上清液:
1000×g离心32分钟去除颗粒,取澄清液。
五、实验步骤
标准品稀释:用标准品稀释液将标准品梯度稀释为6个浓度点(80–0 U/L)。
加样与温育:
每孔加入100μL标准品/样本(建议复孔)。
37℃避光温育90分钟。
洗涤:弃去孔内液体,用洗涤液浸泡30秒后拍干,重复3次。
显色与终止:
每孔加入显色剂A/B液各50μL,37℃避光显色15分钟。
加入终止液50μL终止反应。
检测:酶标仪450nm波长测定OD值,通过标准曲线计算样本浓度。
六、注意事项
试剂平衡:冷藏试剂需室温平衡15–30分钟后再使用。
操作规范:
避免气泡产生,加样时贴壁缓慢加入。
浓缩洗涤液如有结晶,可水浴加热助溶。
安全防护:
终止液含强酸,需佩戴手套操作。
实验区域禁止饮食、吸烟。
质量控制:
每板需设空白孔和标准曲线孔。
板内/板间变异系数应<10%。
七、结果计算
以标准品浓度(U/L)为横坐标,OD值为纵坐标绘制四参数拟合曲线。
样本浓度=曲线方程OD值代入结果×稀释倍数。
八、保存与有效期
未开封试剂盒:2–8℃保存6个月。
已开封酶标板:密封袋装2–8℃保存≤1个月。
注:以上仅供参考,不作为实际数据,实验需严格遵循说明或咨询技术老师。
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