人白介素4(IL-4)ELISA检测试剂盒技术说明书

　　BS-0051人白介素4(IL-4)ELISA试剂盒

　　本试剂盒采用双抗体夹心法，用于定量检测人血清、血浆、细胞培养上清液等样本中白介素4(IL-4)的浓度。IL-4由Th2细胞分泌，在免疫调节、B细胞增殖及抗体类别转换中起关键作用^^1^^，其检测对炎症性疾病、过敏反应及肿瘤研究具有重要意义。

　　二、检测原理

　　固相包被：抗IL-4单克隆抗体预包被于微孔板，形成固相捕获层。

　　抗原结合：样本中的IL-4与固相抗体结合，形成免疫复合物。

　　酶标记检测：加入生物素化的抗IL-4抗体，再通过链霉亲和素-HRP(辣根过氧化物酶)结合，形成二抗-酶标复合物^^3^^。

　　显色反应：加入TMB底物，HRP催化显色，颜色深浅与IL-4浓度呈正相关。

　　终止与定量：加入终止液终止反应，在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样本浓度。

　　三、试剂盒组成

　　组分规格(96孔)保存条件

　　预包被酶标板8×12条2-8℃(避光)

　　冻干标准品1支-20℃(长期)

　　标准品/样本稀释液15ml2-8℃

　　生物素化检测抗体120μl2-8℃

　　生物素化抗体稀释液12ml2-8℃

　　链霉亲和素-HRP12ml2-8℃

　　TMB显色液(A/B)各6ml2-8℃(避光)

　　终止液12ml2-8℃

　　20×浓缩洗涤液60ml室温(防结晶)

　　封板膜4张室温

　　说明书1份—

　　四、样本处理

　　血清/血浆：

　　采集：使用无热原、无内毒素试管，避免溶血或高血脂样本。

　　保存：2-8℃可短期保存(≤48小时)，长期需冷冻(-20℃或-80℃)，避免反复冻融。

　　细胞培养上清：

　　离心去除悬浮物，上清直接检测或分装保存。

　　组织匀浆：

　　称取组织加入PBS(pH 7.4)，匀浆后离心取上清。

　　五、操作步骤

　　试剂准备：

　　洗涤液：用蒸馏水1:20稀释浓缩洗涤液(如1ml浓缩液+19ml蒸馏水)，室温平衡。

　　标准品：加入1ml稀释液溶解冻干标准品，配成1000pg/mL母液，按倍比稀释(1000、500、250...0pg/mL)。

　　生物素化抗体：用稀释液将浓缩抗体稀释100倍(如10μl抗体+990μl稀释液)。

　　加样：

　　每孔加入100μL标准品或样本，37℃温育90分钟。

　　洗涤5次，拍干。

　　酶标反应：

　　加入100μL生物素化抗体，37℃温育60分钟。

　　洗涤后加入100μL链霉亲和素-HRP，37℃温育30分钟。

　　显色与终止：

　　加入100μL TMB显色液(A/B等量混合)，避光显色15-20分钟。

　　加入50μL终止液终止反应，30分钟内测定OD值。

　　六、注意事项

　　移液操作：

　　使用校准的移液枪(误差≤2%)，预润洗枪头2-3次，避免交叉污染。

　　加样时枪头接触孔壁上部，平稳排出液体，吹尽残余^^4^^。

　　试剂保存：

　　标准品溶解后需丢弃，不可重复使用。

　　TMB显色液需避光保存，避免光照氧化。

　　实验条件：

　　试剂使用前需平衡至室温(20-25℃)，避免水浴加热。

　　温育时间需一致，确保孔间温度均衡。

　　注：以上仅供参考，本试剂仅供科研使用，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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