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人白介素17(IL-17)ELISA检测试剂盒技术说明书
BS-9770人白介素17(IL-17)ELISA试剂盒
一、产品概述
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA),专用于定量检测人血清、血浆及相关生物液体样本中白细胞介素17(IL-17)的含量。IL-17是一种由Th17细胞分泌的促炎细胞因子,在自身免疫疾病和炎症反应中起关键作用。
二、检测原理
双抗体夹心技术:
预包被抗人IL-17单抗的微孔板捕获样本中的IL-17。
加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗,形成“抗体-抗原-酶标抗体"复合物。
通过TMB显色反应,颜色深浅与IL-17浓度呈正相关,450nm波长下测定吸光度(OD值)。
三、试剂盒组成
组分规格(96孔配置)保存条件
酶标包被板1×96孔2–8℃
标准品(270ng/L)0.5ml×1瓶2–8℃(长期-20℃)
标准品稀释液1.5ml×1瓶2–8℃
酶标试剂6ml×1瓶2–8℃
样品稀释液6ml×1瓶2–8℃
显色剂A/B液各6ml×1瓶2–8℃避光
终止液6ml×1瓶2–8℃
浓缩洗涤液20ml×30倍×1瓶2–8℃
说明书1份室温
四、样本处理要求
血清/血浆:
室温静置10–20分钟,2000–3000转/分离心20分钟,取上清液
避免反复冻融,若出现沉淀需再次离心
细胞培养上清:
离心后取上清,检测分泌性成分时需无菌操作
尿液/组织匀浆:
尿液离心后取上清;组织样本需匀浆后离心分装
五、操作步骤
标准品稀释:
梯度稀释标准品(如270ng/L至1ng/L),每孔加样50μL
样本加样:
样本稀释后加10μL至微孔,加样量40μL(总稀释度5倍)
温育:
37℃避光反应30分钟,封板膜覆盖
洗涤:
洗涤液浸泡1分钟/次,重复3–5次,拍干孔内液体。
显色与终止:
加入TMB显色液避光反应15–20分钟,终止液终止反应。
读数:
酶标仪450nm波长测定OD值,通过标准曲线计算浓度。
六、性能指标
灵敏度:低至0.1pg/mL(小鼠IL-17参考值) ,人IL-17约3.8pg/mL。
检测范围:7.8–500pg/mL(人IL-17C参考值) ,或31.3–2000pg/mL(人IL-17)。
特异性:与IL-17家族其他成员(如IL-17B、IL-17F)无交叉反应。
重复性:板内/板间变异系数<10%
七、注意事项
保存条件:
试剂盒2–8℃保存,标准品长期存放需-20℃
有效期:
6个月(4℃),12个月(-20℃)。
实验环境:
避免强光照射,显色液需37℃预平衡。
八、参考文献
双抗体夹心法原理及操作规范
样本处理与保存指南
试剂盒性能验证数据
注:以上仅供参考,不作为实际数据,实验需严格遵循说明或咨询技术老师。
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