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猪表皮生长因子(EGF)ELISA检测试剂盒技术说明书
BS-4568 猪表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒
一、产品概述
本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附技术,专用于定量检测猪血清、血浆、组织匀浆液及细胞培养上清液中的表皮生长因子(EGF)含量。产品仅供科研使用,适用于猪只生长调控、疾病模型研究等领域。
二、检测原理
固相抗体包被:将抗猪EGF单克隆抗体预包被于微孔板形成固相载体
抗原抗体反应:样本中的EGF与固相抗体结合,再加入生物素标记的二抗形成夹心复合物
酶联显色:加入HRP标记的链霉亲和素,催化TMB底物显色,颜色深浅与样本中EGF浓度呈正相关
定量分析:450nm波长测定吸光度,通过标准曲线计算浓度
三、试剂盒组成
组分 规格 保存条件
预包被微孔板 96孔/板 2-8℃密封
标准品(冻干) 6管 -20℃
酶标二抗 6ml 2-8℃避光
显色剂A/B液 各6ml 2-8℃避光
终止液 6ml 室温
20×洗涤缓冲液 20ml 室温
样本稀释液 6ml 2-8℃
说明书 1份 -
四、样本处理
采集要求:
血清/血浆:EDTA抗凝,静置析出血清后离心(3000rpm×15min)
组织匀浆:按1:9加入生理盐水研磨,离心取上清
细胞上清:1000rpm离心10分钟去除杂质
保存条件:
短期:2-8℃(≤3天)
长期:-20℃(避免反复冻融)
五、操作步骤
标准品稀释:
用标准品稀释液配制480pg/ml原液,按2倍梯度稀释至0pg/ml
稀释序列:480→240→120→60→30→0pg/ml
加样反应:
每孔加入标准品/样本50μl,空白孔不加
37℃孵育30分钟,洗板5次
酶联反应:
加入酶标二抗50μl,37℃孵育30分钟
洗板后加入TMB显色液,避光反应10分钟
终止测定:
加入终止液50μl,30分钟内测定450nm吸光度
六、结果计算
以标准品浓度(pg/ml)为横坐标,OD值为纵坐标绘制标准曲线
样本浓度=标准曲线拟合值×样本稀释倍数(建议5倍稀释)
七、性能参数
指标 参数
检测范围 7.8-500pg/ml
灵敏度 2.51pg/ml
批内精密度 CV<6.6%
批间精密度 CV<7.9%
回收率 91-109%
注:以上仅供参考,不作为实际数据,实验需严格遵循说明或咨询技术老师。 Elisa试剂盒
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