大鼠大豆苷元(Daidzein)ELISA检测试剂盒说明书

　　BS-8567大鼠大豆苷元(Daidzein)ELISA试剂盒

　　产品概述

　　本试剂盒采用竞争性酶联免疫吸附法(ELISA)，专用于定量检测大鼠血浆、血清或组织匀浆等生物样本中的大豆苷元(Daidzein)含量。大豆苷元是一种天然异黄酮类化合物，具有抗氧化、抗炎及调节免疫等生物活性，广泛存在于豆科植物中，其含量检测对药理学研究和营养评估至关重要。本试剂盒基于抗原-抗体特异性结合原理，通过酶标信号放大实现高灵敏度检测，适用于实验室常规分析。

　　试剂盒组成

　　预包被微孔板：96孔(12条×8孔)，板条可拆卸，包被有大豆苷元特异性抗体。

　　标准品：6个浓度梯度(0.13–61.02 ng/mL)，冻干粉状，临用前用标准品稀释液复溶。

　　酶标记物：辣根过氧化物酶(HRP)标记的竞争抗原，棕色避光保存。

　　显色底物：TMB(四甲基联苯胺)溶液，无色透明液体。

　　终止液：2M硫酸溶液，用于终止反应。

　　洗涤液：20×浓缩缓冲液，需用去离子水稀释后使用。

　　样本稀释液：用于调节样本浓度至检测范围。

　　封板膜：2张，用于微孔板密封。

　　说明书：1份。

　　储存条件

　　未开封试剂盒：2–8°C避光保存，有效期12个月。

　　开封后：标准品、酶标记物及显色底物需分装冻存(-20°C)，避免反复冻融;微孔板干燥密封保存。

　　禁止冻结浓缩洗涤液，防止结晶析出。

　　样本处理

　　血浆/血清样本：采集后立即离心(3000 rpm，10分钟)，取上清液，-80°C保存。避免溶血。

　　组织匀浆：称取组织，加入生理盐水(1:9 w/v)匀浆，离心取上清液。

　　注意事项：样本中大豆苷元可能以结合态存在，建议使用β-葡萄糖醛酸酶水解以提高检测灵敏度。样本浑浊时需离心(5000 rpm，10分钟)或过滤(0.22 μm膜)。

　　实验步骤

　　1. 试剂准备

　　洗涤液：用去离子水将20×浓缩液稀释至1×(如10 mL浓缩液+190 mL水)。

　　标准品梯度：用标准品稀释液将冻干标准品复溶，梯度稀释至0.13、0.39、1.17、3.51、10.53、61.02 ng/mL。

　　样本稀释：用样本稀释液将待测样本稀释至检测范围内(建议预实验确定稀释倍数)。

　　2. 加样与孵育

　　每孔加入100 μL标准品或样本(设空白孔仅加样本稀释液)。

　　每孔加入50 μL酶标记物，轻摇混匀。

　　37°C避光孵育60分钟。

　　3. 洗涤

　　弃去孔内液体，每孔加入350 μL洗涤液，静置30秒后甩干，重复5次，拍干。

　　4. 显色与终止

　　每孔加入100 μL显色底物，37°C避光孵育15分钟。

　　每孔加入100 μL终止液，轻摇混匀。

　　5. 测定

　　立即用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度(OD值)，参考波长630 nm。

　　结果计算

　　标准曲线绘制：以标准品浓度(ng/mL)为横坐标，OD值为纵坐标，拟合四参数逻辑曲线(推荐使用专业软件)。

　　样本浓度计算：根据样本OD值代入标准曲线方程，乘以稀释倍数得到实际浓度。

　　性能参数

　　灵敏度：检测限0.13 ng/mL。

　　精密度：板内变异系数(CV)<10%，板间CV<15%。

　　回收率：80–120%(验证方法：加标回收实验)。

　　线性范围：0.13–61.02 ng/mL，相关系数r²≥0.98。

　　特异性：与类似结构化合物(如染料木素)交叉反应率<5%。

　　注意事项

　　操作规范：避免酶标记物和显色底物接触金属离子;显色后30分钟内测定，防止信号衰减。

　　质量控制：每批次实验需包含标准曲线和质控样本(推荐高、中、低浓度)。

　　安全防护：终止液含强酸，需佩戴手套和护目镜操作。

　　废物处理：含酶废物需经灭活处理后再丢弃。

　　常见问题解答

　　信号偏低：检查孵育时间或温度是否不足;确认洗涤步骤是否充分。

　　高背景值：可能因洗涤不净或样本基质干扰，建议增加洗涤次数或优化样本前处理。

　　标准曲线异常：复溶标准品时需充分混匀，避免气泡影响浓度准确性。

　　注：本产品仅供科研使用，不作为实验依据。具体操作请以实际试剂盒说明书为准。

　　大鼠大豆苷元(Daidzein)ELISA检测试剂盒 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。 本生试剂盒