人γ干扰素(IFN-γ)ELISA检测试剂盒技术说明书

　　BS-0033人γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒

　　一、检测原理

　　本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。将抗人IFN-γ单克隆抗体预包被于微孔板，依次加入样本、标准品及生物素标记的检测抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经洗涤后，加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)结合，通过TMB底物显色。颜色深浅与样本中IFN-γ浓度呈正相关，利用酶标仪测定吸光度(OD值)进行定量分析。

　　二、试剂盒组成

　　组分 96孔配置 48孔配置 保存条件

　　预包被微孔板 12孔×8条 12孔×4条 2-8℃

　　冻干标准品 1管 1管 2-8℃(复溶后-20℃)

　　生物素标记抗体 100μL 100μL 2-8℃(避光)

　　链霉亲和素-HRP 100μL 100μL 2-8℃(避光)

　　样本稀释液 30mL 15mL 2-8℃

　　20×洗涤缓冲液 20mL 10mL 2-8℃

　　TMB底物液 10mL 5mL 2-8℃避光

　　终止液 10mL 5mL 2-8℃

　　封板膜 4张 2张 室温

　　三、样本要求

　　1. 样本类型

　　血清/血浆‌：使用EDTA或肝素抗凝，避免溶血。

　　细胞培养上清‌：离心去除颗粒物，避免反复冻融。

　　其他生物体液‌：如脑脊液、胸腹水，需澄清后检测。

　　2. 样本处理

　　稀释比例‌：血清/血浆建议1:5稀释(样本:稀释液=1:4)，细胞上清建议1:2稀释。

　　保存条件‌：短期(≤7天)2-8℃保存，长期需分装冻存于-80℃(避免反复冻融)。

　　四、实验步骤

　　1. 试剂准备

　　洗涤液‌：用蒸馏水将20×浓缩液稀释为1×工作液(如20mL浓缩液+380mL水)。

　　标准品复溶‌：冻干标准品加入1mL标准品稀释液，静置15分钟，配成高浓度母液。

　　梯度稀释‌：取7支EP管，每管加500μL稀释液，从母液转移500μL至一管混匀，依次倍比稀释(示例：1000→500→250→125→62.5→31.25→15.625 pg/mL)。

　　2. 加样与温育

　　每孔加入100μL标准品或稀释后样本(建议复孔检测)。

　　37℃避光温育90分钟，封板膜密封。

　　3. 洗涤

　　甩尽孔内液体，用1×洗涤液洗涤3次，每次浸泡1分钟，拍干。

　　4. 显色与终止

　　每孔加入100μL生物素标记抗体(提前用抗体稀释液1:100稀释)，37℃避光温育60分钟。

　　洗涤后，每孔加入100μL链霉亲和素-HRP(提前用ABC稀释液1:100稀释)，37℃避光温育30分钟。

　　洗涤后，每孔加入100μL TMB底物液，37℃避光显色15-20分钟。

　　每孔加入50μL终止液终止反应(溶液由蓝变黄)。

　　5. 测定

　　30分钟内用酶标仪测定450nm波长OD值(参考波长570-630nm)。

　　五、结果计算

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线(四参数拟合)。

　　根据样本OD值，通过回归方程计算实际浓度，若样本稀释需乘以稀释倍数。

　　六、性能指标

　　参数 指标

　　灵敏度 ≤1.0 pg/mL

　　检测范围 15.63–1000 pg/mL

　　精密度 板内CV <10%

　　回收率 83%-113%

　　特异性 与人IL-2、IL-4等无交叉反应

　　七、注意事项

　　试剂保存‌：未使用板条需密封保存于2-8℃，避免受潮;TMB底物液需避光。

　　样本处理‌：避免使用溶血、高血脂样本;高浓度样本需预实验确定稀释倍数。

　　操作规范‌：

　　加样时避免气泡，枪头需更换。

　　温育时间严格控制在规定范围内，防止蒸发。

　　质量控制‌：每批次实验需设空白孔(S0)及阴性对照。

　　安全提示‌：终止液含酸，需戴手套操作;废弃物按生物危害处理。

　　八、有效期

　　试剂盒在2-8℃下有效期为6个月，拆封后标准品建议分装冻存于-20℃。

　　注：以上仅供参考，本产品仅供科研使用，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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