植物1,5-二磷酸核酮糖羧化酶(RuBisCO)ELISA检测试剂盒技术说明书

　　BS-4938 植物1,5-二磷酸核酮糖羧化酶(RuBisCO)ELISA试剂盒 96T/48T

　　产品概述

　　本试剂盒用于体外定量检测植物组织、细胞及相关液体样本中核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶(RuBisCO)的活性。该酶是植物光合作用Calvin循环的关键酶，其活性直接影响光合速率和光呼吸过程。本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)，具有高灵敏度和特异性。

　　检测原理

　　试剂盒采用双抗体一步夹心法：

　　预包被抗RuBisCO单抗的微孔板捕获样本中的目标酶

　　加入HRP标记的检测抗体形成"抗体-抗原-酶标抗体"复合物

　　经洗涤后，加入TMB显色底物

　　反应终止后，酶标仪在450nm波长测定吸光度(OD值)

　　样品中RuBisCO浓度与OD值呈正相关

　　试剂盒组成

　　组分 规格 保存条件

　　预包被微孔板 12×8孔 4℃

　　标准品(6个浓度梯度) 0.3mL×6管 -20℃

　　酶标抗体 15mL 4℃

　　20×洗涤缓冲液 50mL 室温

　　TMB显色液A/B 各15mL 4℃避光

　　终止液 15mL 室温

　　样本稀释液 30mL 4℃

　　样本处理

　　组织样本

　　称取0.1g组织，加入1mL提取液冰浴匀浆

　　10,000g 4℃离心10分钟

　　取上清液立即检测或-80℃保存(避免反复冻融)

　　细胞样本

　　收集细胞沉淀，加入提取液裂解

　　10,000g 4℃离心10分钟

　　取上清液检测

　　血清/液体样本

　　室温静置2小时或4℃过夜

　　1,000g离心20分钟

　　取上清液检测

　　注意事项‌：

　　避免样本溶血

　　NaN3会抑制HRP活性，禁用含叠氮钠样本

　　新鲜样本优先，冻存样本避免反复冻融

　　操作步骤

　　准备试剂‌：所有试剂使用前平衡至室温(20-25℃)

　　加样‌：

　　标准品孔：50μL不同浓度标准品

　　样本孔：50μL待测样本

　　空白孔：不加

　　温育‌：每孔加入100μL酶标抗体，37℃避光反应60分钟

　　洗涤‌：每孔加350μL洗涤液，静置1分钟后甩干，重复5次

　　显色‌：每孔加入50μL底物A和B，37℃避光反应15分钟

　　终止‌：每孔加入50μL终止液

　　测定‌：15分钟内用酶标仪测定450nm OD值

　　结果计算

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线

　　根据样本OD值在标准曲线上查得浓度

　　样本浓度=测得浓度×稀释倍数(如有)

　　性能指标

　　检测范围：18-650 U/L

　　灵敏度：≤5 U/L

　　批内变异系数：<10%

　　批间变异系数：<15%

　　注意事项

　　试剂盒有效期6个月，2-8℃保存

　　不同批号试剂不可混用

　　显色液避光保存

　　洗涤不净会导致假阳性

　　终止液含腐蚀性物质，操作时需防护

　　所有废弃物按生物危害物处理

　　所需仪器

　　酶标仪(450nm滤光片)

　　精密移液器(0.5-1000μL)

　　37℃恒温箱

　　洗板机(可选)

　　涡旋混合器

　　注：供科研使用，以上资料供参考，不作为实验依据，具体请咨询技术老师是或品牌商。

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