人白介素8(IL-8CXCL8)ELISA检测试剂盒技术说明书

　　BS-1551  人白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA试剂盒

　　一、产品信息

　　产品名称‌：人白介素8(IL-8/CXCL8)酶联免疫吸附测定试剂盒

　　规格‌：96孔板/48孔板(可选)

　　检测方法‌：双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)

　　检测范围‌：7.81-500 pg/mL(具体以实际产品说明为准)

　　灵敏度‌：≤4.69 pg/mL(具体以实际产品说明为准)

　　样本类型‌：血清、血浆、细胞培养上清液、细胞裂解液等生物样本

　　保质期‌：6个月(2-8℃避光保存，具体以产品标签为准)

　　用途‌：仅供科研使用，不可用于临床诊断或治疗

　　二、检测原理

　　本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。预先包被在酶标板孔中的抗人IL-8/CXCL8单克隆抗体捕获样本或标准品中的目标抗原。加入生物素标记的检测抗体后，形成“包被抗体-抗原-检测抗体"复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲和素，通过特异性结合完成信号放大。洗涤去除未结合成分后，加入TMB显色底物。辣根过氧化物酶催化底物反应，生成蓝色产物，加入终止液后变为黄色。颜色的深浅与样本中IL-8/CXCL8的浓度成正比，通过酶标仪在450nm波长处测定吸光度值，依据标准曲线计算样本浓度。

　　三、试剂盒组成

　　预包被抗体酶标板‌：96孔或48孔，含抗人IL-8/CXCL8单克隆抗体

　　标准品‌：冻干粉，复溶后形成系列浓度梯度

　　样本稀释液‌：用于稀释样本和标准品

　　生物素标记检测抗体‌：与目标抗原特异性结合

　　生物素标记抗体稀释液‌：用于稀释生物素标记检测抗体

　　辣根过氧化物酶标记亲和素‌：信号放大试剂

　　酶结合物稀释液‌：用于稀释辣根过氧化物酶标记亲和素

　　浓缩洗涤液‌：20×浓缩液，需用去离子水稀释

　　显色底物(TMB)‌：避光保存

　　终止液‌：含稀硫酸，具轻微腐蚀性

　　封板膜‌：用于温育时密封酶标板

　　说明书‌：详细操作指南

　　四、实验准备

　　1. 样本收集与处理

　　血清样本‌：全血室温静置2小时或4℃过夜，2000rpm离心20分钟，取上清。4℃保存1周内检测，长期保存需分装冻存于-20℃以下，避免反复冻融。

　　血浆样本‌：使用EDTA或肝素抗凝，处理方法同血清。

　　细胞培养上清‌：2000rpm离心20分钟去除细胞碎片，取上清检测。

　　样本稀释‌：若样本浓度超出检测范围，需用样本稀释液稀释后重新检测。

　　2. 试剂准备

　　浓缩洗涤液‌：用去离子水按1:20比例稀释，室温平衡后使用。

　　标准品‌：按说明书要求用标准品稀释液复溶，轻柔混匀避免气泡，形成系列浓度梯度。

　　生物素标记检测抗体‌：使用前用生物素标记抗体稀释液稀释。

　　辣根过氧化物酶标记亲和素‌：使用前用酶结合物稀释液稀释。

　　3. 自备器材

　　酶标仪(450nm波长)

　　微量移液器及吸头

　　洗板机或洗瓶

　　37℃恒温箱或水浴锅

　　去离子水

　　五、操作步骤

　　加样‌：从平衡至室温的铝箔袋中取出所需板条，设置标准品孔、样本孔和空白孔。标准品孔加入系列浓度标准品50μL，样本孔加入待测样本50μL，空白孔不加。

　　温育‌：除空白孔外，每孔加入100μL稀释后的生物素标记检测抗体，封板膜封住反应孔，37℃温育60分钟。

　　洗涤‌：弃去孔内液体，每孔加满洗涤液(350μL)，静置1分钟后甩去，重复洗涤3-5次，拍干。

　　加酶标物‌：每孔加入100μL稀释后的辣根过氧化物酶标记亲和素，封板膜封住，37℃温育30分钟。

　　洗涤‌：同步骤3。

　　显色‌：每孔加入90μL显色底物(TMB)，37℃避光显色15-30分钟。

　　终止‌：每孔加入50μL终止液，终止反应(蓝色变为黄色)。

　　检测‌：30分钟内用酶标仪在450nm波长处测定吸光度值(OD值)。

　　六、结果计算

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。根据样本OD值，从标准曲线中计算样本浓度。若样本经稀释，结果需乘以稀释倍数。

　　七、注意事项

　　试剂平衡‌：所有试剂和样本使用前需平衡至室温(20-25℃)，避免温度差异影响结果。

　　试剂保存‌：未使用试剂需及时放回2-8℃保存，避免反复冻融浓缩洗涤液。

　　操作规范‌：

　　避免试剂和样本交叉污染。

　　洗板时确保孔内液体被充分吸干，但避免过度干燥。

　　显色底物需避光保存，使用前应为无色或浅色。

　　终止液具腐蚀性，避免接触皮肤和衣物。

　　质量控制‌：

　　每次实验设置空白孔和标准品孔。

　　板内、板间变异系数应小于10%。

　　回收率应在80%-120%之间。

　　样本处理‌：所有样本视为潜在传染源，操作时需佩戴防护装备，废弃物按生物安全规范处理。

　　八、产品性能

　　灵敏度‌：≤4.69 pg/mL(具体以实际产品说明为准)。

　　特异性‌：与IL-8类似物无交叉反应。

　　精密度‌：板内、板间变异系数均小于10%。

　　回收率‌：80%-120%。

　　线性范围‌：7.81-500 pg/mL(具体以实际产品说明为准)。

　　注：以上仅供参考，本产品仅供科研使用，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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