人白介素6(IL-6)ELISA检测试剂盒说明书

　　BS-0049 人白介素6(IL-6)ELISA检测试剂盒

　　1. 目的‌

　　本试剂盒用于定量检测人血清、血浆、细胞培养上清液及组织匀浆样本中白介素6(IL-6)的浓度。本检测为科研提供数据，供参考。

　　2. 实验原理‌

　　采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)：

　　捕获抗体‌：抗人IL-6单抗预包被于微孔板，形成固相抗体层。

　　抗原结合‌：样本中IL-6与捕获抗体结合，再加入生物素化检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体"复合物。

　　显色反应‌：加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素，催化底物TMB显色(蓝色→黄色)，颜色深浅与IL-6浓度正相关，450nm波长下测定吸光度(OD值)。

　　3. 试剂盒组成‌

　　酶标板‌：96孔/48孔预包被抗IL-6抗体。

　　标准品‌：6个梯度浓度(0、3、6、12、24、48 pg/mL)，冻干粉保存。

　　检测抗体‌：生物素化抗IL-6抗体，2-8℃避光保存。

　　酶结合物‌：HRP标记链霉亲和素，避光保存。

　　底物液‌：TMB显色液，避光保存。

　　终止液‌：2M硫酸，终止显色反应。

　　洗涤液‌：20×浓缩液，需稀释使用。

　　样本稀释液‌：10×浓缩液，用于样本预处理。

　　封板膜‌：密封酶标板，防止蒸发。

　　说明书‌：详细操作流程及注意事项。

　　4. 样本处理‌

　　血清/血浆‌：室温凝固10-20分钟，离心(2000-3000转/分，20分钟)收集上清，避免溶血。

　　细胞上清‌：离心去除细胞碎片，检测分泌性IL-6。

　　组织匀浆‌：PBS稀释至细胞浓度约100万/mL，反复冻融释放细胞内成分，离心取上清。

　　保存‌：2-8℃短期(≤48小时)或-20℃/-70℃长期保存，避免反复冻融。

　　禁忌‌：避免含NaN3样本，因NaN3抑制HRP活性。

　　5. 操作步骤‌

　　标准品稀释‌：冻干标准品用蒸馏水复溶，梯度稀释至0-48 pg/mL。

　　加样‌：

　　标准品孔：各加50μL不同浓度标准品。

　　样本孔：加40μL样本稀释液+10μL样本(5倍稀释)。

　　空白孔：不加样本及酶标试剂。

　　温育‌：37℃孵育60分钟，封板膜密封。

　　洗涤‌：甩干孔内液体，用洗涤液浸泡10-30秒，重复3-5次。

　　加酶标试剂‌：每孔加100μL HRP标记抗体，37℃孵育30分钟。

　　显色‌：加100μL TMB底物，避光显色15分钟。

　　终止‌：加100μL终止液，蓝色变黄色，30分钟内测OD值。

　　6. 结果计算‌

　　标准曲线‌：以标准品浓度(pg/mL)为横坐标，OD值为纵坐标，绘制曲线。

　　样本浓度‌：根据样本OD值在标准曲线上查得IL-6含量，乘以稀释倍数。

　　注意事项‌：

　　预实验确定样本稀释倍数，确保OD值在标准曲线范围内。

　　避免气泡产生，轻柔混匀标准品。

　　显色底物避光保存，终止液顺序与显色一致。

　　7. 性能指标‌

　　灵敏度‌：低检测浓度<0.1 pg/mL。

　　特异性‌：仅识别人IL-6，不与其他细胞因子交叉反应。

　　重复性‌：板内、板间变异系数<10%。

　　8. 注意事项‌

　　试剂保存‌：2-8℃避光，有效期6个月，勿使用过期试剂。

　　操作规范‌：

　　避免接触微孔板内壁，防止污染。

　　洗板时充分浸泡，提高洗涤效果。

　　显色反应避光，终止液充分混匀。

　　样本限制‌：不可检测NaN3样本。

　　9. 储存条件‌

　　未开封试剂盒：2-8℃保存。

　　开封后：按组分说明分装保存，避免反复冻融。

　　注：以上仅供参考，本试剂仅供科研使用，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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