人B细胞生长因子(BCGF)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-0279 人B细胞生长因子(BCGF)ELISA试剂盒

　　一、实验目的

　　本试剂盒用于定量检测人血清、血浆及相关液体样本中B细胞生长因子(BCGF)的浓度。

　　二、实验原理

　　采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。微孔板预包被抗BCGF抗体，样本中的BCGF与包被抗体结合后，加入生物素标记的检测抗体形成"抗体-抗原-酶标抗体"复合物。洗涤后加入辣根过氧化物酶标记的亲和素，经TMB底物显色，颜色深浅与样本中BCGF浓度成正比。

　　三、试剂盒组成

　　预包被酶标板(96孔/48孔)

　　标准品(2700ng/L)

　　标准品稀释液

　　生物素标记抗体

　　酶结合物(HRP标记)

　　显色底物A/B液

　　终止液

　　20×浓缩洗涤液

　　封板膜

　　说明书

　　四、操作步骤

　　1. 试剂准备

　　将试剂盒平衡至室温(20-25℃)30分钟

　　浓缩洗涤液用蒸馏水稀释20倍备用

　　2. 标准品稀释

　　取6个EP管，每管加150μL标准品稀释液

　　首管加入150μL标准品原液混匀(1800ng/L)

　　依次倍比稀释至2.5ng/L

　　3. 加样

　　设空白孔(仅加稀释液)、标准孔、样本孔

　　每孔加100μL标准品/样本(建议设复孔)

　　37℃孵育90分钟

　　4. 洗涤

　　甩尽孔内液体，每孔加洗涤液350μL

　　静置30秒后弃去，重复5次

　　拍干(勿用吸水纸直接接触孔底)

　　5. 酶标反应

　　每孔加100μL生物素标记抗体

　　37℃孵育60分钟

　　同法洗涤5次

　　6. 显色反应

　　每孔加底物A/B液各50μL(避光操作)

　　37℃避光孵育15分钟

　　每孔加终止液50μL终止反应

　　7. 检测

　　30分钟内用酶标仪测450nm波长OD值

　　绘制标准曲线(OD值 vs 浓度)

　　五、注意事项

　　试剂使用前需平衡至室温，避免反复冻融

　　不同批号试剂不可混用，有效期前使用

　　加样时间控制在5分钟内，推荐使用排枪

　　洗涤需干净，拍干时避免交叉污染

　　显色剂B液避光保存，终止液有腐蚀性

　　样本OD值超出标准曲线范围时需稀释重测

　　六、结果计算

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线

　　样本浓度=标准曲线对应浓度×稀释倍数

　　七、性能指标

　　灵敏度：<1号标准品浓度

　　线性范围：2.5-1800ng/L(R²>0.99)

　　板内/板间变异系数<10%

　　八、样本要求

　　血清：室温凝固后离心取上清

　　血浆：EDTA抗凝，避免溶血

　　保存：-20℃可存3个月，避免反复冻融

　　(注：具体操作请以实际试剂盒说明书为准)

　　注：供科研使用，以上资料供参考，不作为实验依据，具体请咨询技术老师是或品牌商。

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