小鼠骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA试剂盒使用说明书

小鼠骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA试剂盒采用‌双抗体夹心ABC-ELISA法‌，可精准定量小鼠血清、血浆、细胞培养上清、骨组织裂解液等样本中的BMP-7含量，仅用于科研实验。

货号：BS-2513

   试剂盒基础信息

检测原理‌：预包被抗小鼠BMP-7单抗的酶标板，与样本中的BMP-7特异性结合后，加入生物素化抗BMP-7抗体形成免疫复合物，再与HRP标记的链霉亲和素结合，催化TMB底物显色，450nm处OD值与BMP-7浓度成正比，通过标准曲线完成定量。

常规规格‌：48T/96T两种盒装，2-8℃全程避光密封保存，严禁冷冻，避免抗体和酶标记物变性失活。

性能‌：检出限＜15pg/ml，板内/板间变异系数均＜10%，仅识别天然和重组小鼠BMP-7，与其他小鼠细胞因子无交叉反应。

   试剂盒标准组分

组分名称常规规格保存要求

预包被酶标板96孔/48孔可拆条2-8℃干燥密封

冻干BMP-7标准品2ng/瓶复溶后分装-20℃冻存

10×标本稀释液12ml2-8℃存放

20×浓缩洗涤液50ml2-8℃，结晶37℃水浴溶解

生物素化检测抗体工作液12ml2-8℃避光

HRP标记亲和素工作液12ml2-8℃避光

TMB底物显色液12ml2-8℃避光

2M硫酸终止液12ml室温密封存放

   实验前试剂准备

样本处理‌：新鲜小鼠血清/血浆采集后1000×g离心10分钟，2-8℃可短期存放48小时，长期保存需分装后-20℃/-80℃冻存，全程避免反复冻融。

标准品梯度配制‌：标准品加入0.5ml蒸馏水复溶，得到4000pg/ml母液，通过对倍稀释得到2000、1000、500、250、125、62.5、31.2pg/ml系列梯度，最后一管为空白对照。

工作液稀释‌：10×标本稀释液用蒸馏水按1:10稀释，20×浓缩洗涤液按1:20稀释，现配现用。

试剂平衡‌：所有组分从冰箱取出后，室温平衡30分钟，确保反应体系温度均匀稳定。

   标准操作步骤

加样‌：每孔加入标准品或待测样本100μl，轻轻晃动混匀，封板后37℃孵育120分钟。

洗板‌：弃去孔内液体，加满洗涤液浸泡30秒，重复洗板4-6次，最后在吸水纸上拍干无残留水渍。

加检测抗体‌：每孔加入生物素化抗体工作液100μl，封板后37℃孵育60分钟，再次重复洗板操作。

加酶结合物‌：每孔加入HRP标记亲和素工作液100μl，封板后37℃避光孵育30分钟，第三次重复洗板操作。

显色‌：每孔加入TMB底物液100μl，37℃避光静置显色15分钟，此时液体呈现明显蓝色梯度。

终止读数‌：每孔快速加入终止液100μl，蓝色立即转为黄色，15分钟内用酶标仪在‌450nm波长‌下读取各孔OD值。

   结果计算方法

所有OD值先扣除空白对照孔的背景值，消除基线干扰。

以标准品梯度浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标，用四参数拟合绘制标准曲线，保证R²≥0.99。

将样本校正后的OD值代入标准曲线，直接查出对应BMP-7浓度，若样本稀释后检测，最终结果需乘以对应稀释倍数。

   关键注意事项

所有标准品和待测样本必须设置双复孔，变异系数CV＞10%的孔组需重新复测，保证数据重复性。

洗板操作是核心关键步骤，洗涤不充分会直接导致背景噪音飙升，OD值系统性偏高。

未用完的酶标板条立即放回原铝箔袋，加入干燥剂后密封2-8℃干燥保存，避免包被抗体受潮脱落。

实验全程佩戴手套，避免直接接触终止液和显色液，一旦接触立即用大量流动清水冲洗。

注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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