本生（天津）健康科技有限公司的小鼠中性粒细胞趋化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA检测试剂盒，采用双抗体夹心酶联免疫吸附法，仅用于体外科研研究，不可用于临床诊断。以下是适配本生品牌标准体系的完整说明书内容：

    产品信息

    货号：BS-2541

    产品名称‌：小鼠中性粒细胞趋化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA检测试剂盒

    常规规格‌：96T/48T

    检测原理‌：预包被NAP-2特异性捕获抗体，通过“捕获抗体-靶蛋白-生物素化检测抗体-亲和素-HRP"形成免疫复合物，TMB显色后在450nm波长下读取OD值，浓度与OD值呈正相关，通过标准曲线计算样本浓度。

    性能指标‌：

    灵敏度：≤3.1pg/mL

    检测范围：15.6~1000pg/mL

    重复性：板内变异系数<10%，板间变异系数<15%

    特异性：与其他结构类似物无明显交叉反应

    试剂盒组成与保存

    所有未开封试剂统一在‌2-8℃避光冷藏‌，禁止冷冻，有效期6个月；剩余未使用板条需放回密封袋加干燥剂，1个月内用完。

    组分名称48T规格96T规格

    预包被酶标板8孔×6条8孔×12条

    冻干标准品1管2管

    标准品/样品稀释液6mL12mL

    100×生物素化检测抗体60μL120μL

    生物素化抗体稀释液6mL12mL

    100×亲和素-HRP复合物60μL120μL

    SP复合物稀释液6mL12mL

    TMB显色液6mL12mL

    终止液6mL12mL

    20×浓缩洗涤液30mL30mL×2瓶

    封板膜2张2张

    纸质说明书1份1份

    样本收集与预处理

    所有样本避免溶血、脂血，禁止反复冻融，采集后2-8℃可短期保存48小时，长期需分装后-20℃冻存：

    血清‌：全血室温放置1小时凝固，2-8℃1000×g离心20分钟，取上清检测。

    血浆‌：推荐EDTA抗凝，采集后30分钟内2-8℃1000×g离心15分钟，取上清检测。

    组织匀浆‌：预冷PBS冲洗去除血液，按1:9重量体积比加入PBS（推荐添加蛋白酶抑制剂），冰上研磨后反复冻融破碎，2-8℃5000×g离心10分钟，取上清检测。

    细胞提取液‌：10^6个细胞用150-200μLPBS重悬，超声或反复冻融破碎，2-8℃1500×g离心10分钟，取上清检测。

    细胞培养上清‌：2-8℃1000×g离心20分钟去除细胞碎片，取上清检测。

    实验前试剂准备

    所有试剂提前从2-8℃取出，室温平衡30分钟再使用：

    洗涤液配制‌：20×浓缩洗涤液用新鲜去离子水按1:20比例稀释，现配现用；若浓缩液析出结晶，37℃水浴溶解后再稀释使用。

    标准品配制‌：标准品瞬时离心后，沿管壁加入对应体积标准品稀释液，静置15分钟轻柔混匀，通过倍比稀释得到7个梯度浓度，一管为空白对照（0pg/mL）。

    工作液配制‌：生物素化检测抗体、SP复合物使用前20分钟，用对应稀释液按1:100比例稀释成1×工作液，当日配制当日使用，剩余试剂弃去。

    标准操作步骤

    取出所需数量的酶标板条，剩余板条密封放回2-8℃保存。设置标准品孔、样本孔、空白孔，每孔分别加入50μL对应标准品或待测样本。

    除空白孔外，每孔加入100μL新鲜配制的生物素化检测抗体工作液，贴紧封板膜，37℃恒温箱避光孵育60分钟。

    弃去孔内液体，每孔加满300μL1×洗涤液，静置浸泡30秒后倒尽，在厚吸水纸上用力拍干，该步骤重复5次，一次拍干确保孔内无残留液体。

    除空白孔外，每孔加入100μLSP复合物工作液，贴紧封板膜，37℃避光孵育30分钟。

    重复上述洗板操作5次，拍干所有孔内残留液体。

    每孔加入90μLTMB显色液，贴紧封板膜，37℃避光孵育10-20分钟，观察到标准品高浓度孔出现明显蓝色即可终止。

    每孔加入50μL终止液，轻轻混匀，蓝色立即转为黄色。终止后30分钟内，用酶标仪在‌450nm波长‌下读取各孔OD值，推荐搭配630nm作为校正波长提升读数精度。

    结果计算

    所有标准品和样本的OD值，先减去空白孔的OD值，设置复孔取平均值。

    以标准品浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标，使用Origin、ELISACalc等软件进行‌四参数逻辑（4-PL）曲线拟合‌，绘制标准曲线。

    根据待测样本的OD值，在标准曲线上推算出对应拟合浓度，再乘以样本预稀释倍数，得到样本中NAP-2的实际浓度。

    关键注意事项

    不同样本、不同试剂更换操作枪头，严格避免交叉污染。

    孵育过程中封板膜必须贴紧，孵育箱内放置湿盒保湿，避免边缘孔液体蒸发导致边缘效应。

    洗板不充分会直接导致本底升高、数据偏差，禁止用普通卫生纸擦拭孔底，避免纸屑残留污染。

    底物显色液出现淡蓝色时禁止使用，说明已被污染失效。

    实验全程做好生物安全防护，所有接触过样本的耗材按生物废弃物规范处理。

    注：以上科研产品资料供参考，具体请咨询!

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