微生物辅酶F420(F420)ELISA科研试剂盒产品说明书

    本生BUNSEN微生物辅酶F420(F420)ELISA科研试剂盒（货号BS-4855）是专为微生物样本中辅酶F420定量检测打造的科研级试剂，采用经典双抗体夹心法，操作简便、结果重复性优异，‌仅用于科研实验，不可用于临床诊断或治疗用途‌。

    产品基础信息

    检测原理‌：用纯化的辅酶F420特异性抗体包被微孔板制成固相抗体，依次加入样本、HRP标记的辅酶F420抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经洗涤后加入TMB底物显色，颜色深浅与样本中辅酶F420含量呈正相关，通过酶标仪在450nm波长下读取OD值，结合标准曲线计算得到精准浓度。

    检测范围‌：96T规格为‌1.2ng/L-50ng/L‌，适配不同浓度梯度的微生物样本检测需求。

    适用样本类型‌：各类微生物菌体裂解液、产甲烷菌培养上清、厌氧发酵体系样本等微生物来源生物样本。

    性能指标‌：批内变异系数<8%，批间变异系数<10%，回收率在85%-115%区间，线性相关系数r≥0.990。

    试剂盒组分与储存要求

    组分名称96孔常规配置储存条件

    预包被96孔可拆酶标板12孔×8条2-8℃密封保存，未用完板条装入密封袋存放

    辅酶F420原倍标准品1支2-8℃避光保存

    样本稀释液20mL2-8℃保存

    30×浓缩洗涤液30mL2-8℃保存，低温析出结晶可水浴加温助溶

    HRP标记酶标试剂10mL2-8℃避光保存

    显色剂A液10mL2-8℃避光保存

    显色剂B液10mL2-8℃避光保存

    终止液10mL常温储存

    封板膜3张常温存放，仅限一次性使用

    完整未开封试剂盒2-8℃条件下有效期为‌6个月‌，所有试剂禁止反复冻融，底物类试剂全程避光存放。

    标准实验操作步骤

    试剂预处理‌：实验前将所有试剂从冰箱取出，室温平衡15-30分钟；30×浓缩洗涤液用蒸馏水按1:29比例稀释成1×工作液。

    标准品稀释‌：将试剂盒提供的原倍标准品，按照说明书梯度稀释成5个不同浓度的标准工作液，用于后续绘制标准曲线。

    加样操作‌：设置空白孔、标准品孔、待测样本孔，标准品孔准确加入不同浓度标准品各50μL；待测样本孔先加样本稀释液40μL，再加入待测样本10μL（样本最终稀释5倍），轻轻晃动混匀。

    温育孵育‌：用封板膜覆盖酶标板，放入37℃恒温箱中温育30分钟。

    洗板操作‌：揭掉封板膜，弃去孔内液体甩干，每孔加满1×洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗板5次，最后一次在吸水纸上拍干孔内残留液体。

    加酶反应‌：除空白孔外，每孔加入HRP标记酶标试剂50μL，重新覆盖新封板膜，37℃恒温孵育30分钟，再次重复上述洗板步骤5次并拍干。

    显色终止‌：每孔先加入显色剂A液50μL，再加入显色剂B液50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟；随后每孔立即加入终止液50μL，此时蓝色液体转为黄色，终止反应。

    读数计算‌：以空白孔调零，在加终止液后15分钟内，用酶标仪在450nm波长下依次读取各孔的吸光度（OD值）；以标准品浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过样本的OD值在标准曲线上换算出对应浓度，再乘以稀释倍数5，得到样本中辅酶F420的实际浓度。

    关键操作注意事项

    不同批次试剂盒的试剂不可交叉混用，避免不同抗体、底物体系发生反应干扰实验结果。

    绝对不能检测含NaN3的样本，NaN3会直接抑制HRP辣根过氧化物酶活性，导致显色失败。

    样本采集提取后需尽快实验，若不能立即检测，可将样本置于-20℃保存，但必须严格避免反复冻融，防止辅酶F420降解。

    若样本中辅酶F420浓度超出标准曲线最高浓度，需将样本用样本稀释液进一步稀释n倍后重新检测，最终结果乘以总稀释倍数（n×5）。

    所有实验废弃物需按传染物规范处理，避免直接接触皮肤黏膜，实验全程佩戴一次性手套操作。

    注：以上科研产品资料供参考，具体请咨询!

    本生BUNSEN一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。