小鼠组织多肽抗原(TPA)ELISA检测试剂盒说明书

    BS-2521  小鼠组织多肽抗原(TPA)ELISA试剂盒

    本试剂盒仅供‌科研体外研究使用‌，用于定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中小鼠组织多肽抗原(TPA)的含量，有效期6个月，全程需2-8℃冷藏保存。

    实验原理

    试剂盒采用‌双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）‌：往预先包被小鼠TPA捕获抗体的微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，37℃温育后洗涤；加入TMB底物显色，TMB在过氧化物酶催化下转化为蓝色，遇酸性终止液最终变为黄色，颜色深浅与样本中TPA浓度呈正相关，用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），即可换算出样本中TPA的实际浓度。

    试剂盒组成（96孔/48孔配置）

    名称96孔配置48孔配置备注

    微孔酶标板12孔×8条12孔×4条可拆分使用剩余板条

    标准品0.3mL×6管0.3mL×6管浓度依次为120、60、30、15、7.5、3.75U/L

    样本稀释液6mL3mL用于稀释超量程样本

    检测抗体-HRP10mL5mL辣根过氧化物酶标记

    20×洗涤缓冲液25mL15mL按1:20用蒸馏水稀释使用

    底物A6mL3mL显色组分

    底物B6mL3mL显色组分

    终止液6mL3mL终止酶促反应

    封板膜2张2张密封反应孔

    说明书1份1份实验操作指引

    自封袋1个1个收纳剩余板条

    样本处理及要求

    血清‌：全血室温放置2小时或4℃过夜，1000×g离心20分钟取上清，-20℃/-80℃保存，避免反复冻融。

    血浆‌：用EDTA或肝素抗凝，采集后30分钟内2-8℃1000×g离心15分钟取上清，低温保存避免反复冻融。

    组织匀浆‌：预冷PBS冲洗组织去除残留血液，按1:9重量体积比加入含蛋白酶抑制剂的PBS，冰上研磨后超声破碎，5000×g离心5-10分钟取上清检测。

    细胞培养上清‌：1000×g离心20分钟取上清，低温保存避免反复冻融。

    注：溶血样本会严重干扰检测结果，禁止使用溶血标本进行实验。

    自备试剂与器材

    450nm波长酶标仪

    高精度移液器及对应量程滤芯枪头

    37℃恒温孵育箱

    蒸馏水或去离子水

    详细操作步骤

    试剂盒从冷藏环境取出，室温平衡20分钟后，取出所需板条，剩余板条密封放回4℃保存。

    设置标准品孔、样本孔、空白孔：标准品孔各加不同浓度标准品50μL，样本孔加待测样本50μL，空白孔不加任何液体。

    除空白孔外，每孔加入HRP标记检测抗体100μL，封板膜密封后37℃恒温箱温育60分钟。

    弃去孔内液体，吸水纸上拍干，每孔加满350μL洗涤液，静置1分钟后甩去液体，重复洗板5次。

    每孔依次加入底物A、底物B各50μL，37℃避光孵育15分钟。

    每孔加入终止液50μL，15分钟内用酶标仪在450nm波长下测定各孔OD值。

    结果计算

    以标准品OD值为横坐标、对应TPA浓度为纵坐标，绘制标准曲线并得到回归方程，将样本OD值代入方程，即可计算出待测样本中小鼠TPA的实际浓度。

    注意事项

    所有试剂使用前必须平衡至20-25℃室温，使用后立即放回2-8℃冷藏，禁止使用过期试剂。

    洗板必须，加入底物前确保孔内液体吸干，温育过程中绝对不能让微孔干燥。

    底物显色液必须为无色或极浅的颜色，已经变蓝的底物液已氧化失效，禁止使用。

    所有操作全程避免试剂、样本交叉污染，实验过程中禁止接触漂白溶剂及挥发气体，防止破坏抗体活性。

    板底残留液体、手指印会直接干扰OD值读取，读数前必须将板底擦拭干净。

    试剂盒性能

    检测范围：‌3.75U/L-120U/L‌

    灵敏度：最小检测浓度低于3.75U/L

    重复性：板内、板间变异系数（CV）均小于10%

    特异性：不与小鼠其他同源细胞因子发生明显交叉反应

    注：以上科研产品资料供参考，具体请咨询!

    本生BUNSEN一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。