如何正确使用Roche 480配套PCR板?避免交叉污染与信号干扰的实操指南

　　以下是天津本生使用Roche 480配套PCR板时避免交叉污染与信号干扰的详细操作指南：

　　一、实验前准备‌

　　耗材选择‌

　　必须使用与LightCycler® 480匹配的96孔PCR板(推荐半裙边白色板)。

　　选择专用光学封板膜，确保密封性并减少荧光背景干扰。

　　灭菌处理‌

　　新开封的PCR板需紫外线照射15分钟或高压灭菌(若材料允许)。

　　操作台和移液器需用75%乙醇擦拭消毒。

　　二、反应体系配置‌

　　加样规范‌

　　反应液需在冰上配制，避免高温降解。

　　每孔体积严格控制在20μL(误差<1μL)，使用低吸附吸头分装。

　　防污染措施‌

　　分区操作：核酸提取、体系配制、PCR扩增需在不同超净台进行。

　　每加样一次更换吸头，避免气溶胶污染。

　　三、封板与离心‌

　　密封操作‌

　　封膜时需覆盖孔口，轻压边缘排除气泡。

　　禁止使用记号笔在板或膜上标记(可能干扰荧光信号)。

　　离心参数‌

　　2000 rpm离心30秒，确保液体集中至孔底。

　　四、仪器操作‌

　　装板注意事项‌

　　确认板底清洁干燥，避免指纹或灰尘影响光学检测。

　　放入仪器时对准托架卡槽，避免倾斜。

　　程序设置‌

　　热盖温度设为105°C，防止蒸发。

　　荧光采集通道需与染料匹配(如FAM通道用于SYBR Green)。

　　五、实验后处理‌

　　数据保存‌

　　使用光盘刻录原始数据，避免U盘传输导致文件损坏。

　　耗材废弃‌

　　PCR板为一次性使用，禁止剪开重复利用。

　　实验结束后立即带离实验室，按生物危害废物处理。

　　关键问题规避‌

　　交叉污染‌：

　　操作全程佩戴无粉手套;

　　每批次实验预留至少2孔阴性对照。

　　信号干扰‌：

　　白色PCR板可减少背景荧光;

　　避免强光直射反应板。

　　通过规范操作流程和严格分区管理，可显著提升实验结果可靠性。

　　109611 C0.1ml 无裙边96孔PCR板 透明10块/盒，20盒/箱

　　109611M 0.1ml 无裙边96孔PCR板 乳白10块/盒，20盒/箱

　　209601C 0.2ml 无裙边96孔PCR板 透明10块/盒，20盒/箱

　　209621C 0.2ml 半裙边96孔PCR板 透明10块/盒，20盒/箱

　　104801M Roche480专用96孔PCR板 乳白10块/盒，20盒/箱

　　注：以上资料仅供参考，具体请咨询技术老师。

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