ELISA实验可能出现的11个问题及原因分析

　　以下是天津本生ELISA实验中可能出现的11个常见问题及其原因分析，综合多个专业来源整理：

　　一、显色弱或无信号

　　试剂活性降低‌

　　运输/保存温度过高或试剂过期导致酶失活

　　孵育条件不当‌

　　温度未达37℃或时间不足，抗原抗体结合不充分

　　加样误差‌

　　移液器不准、吸头残留液体或加样速度过快导致量不足

　　二、高背景/假阳性

　　洗涤不净‌

　　洗液量不足、洗板针堵塞或浸泡时间过短，未结合物质残留

　　非特异性结合‌

　　封闭不充分或样本中血红蛋白/细菌污染干扰

　　孵育过度‌

　　温育时间过长或温度过高

　　三、白板(全板无显色)

　　试剂错用‌

　　误将终止液当作洗涤液或漏加酶标抗体

　　底物失效‌

　　TMB/H2O2配制过久或未避光保存

　　四、重复性差(CV>15%)

　　操作不一致‌

　　加样时间/速度差异大或复孔间洗涤力度不均

　　移液器误差‌

　　枪头密封性差或未校准导致加样量波动

　　五、标准曲线异常

　　稀释错误‌

　　标准品复溶不充分或梯度稀释比例错误

　　孔间污染‌

　　加样时液体溅洒或枪头交叉使用

　　六、阴性对照显阳性

　　交叉污染‌

　　样本/试剂污染或洗板不净

　　封闭失效‌

　　封闭液浓度不足或孵育时间过短

　　七、显色过快/过慢

　　酶浓度异常‌

　　HRP标记抗体过量或失活

　　环境干扰‌

　　室温过高或底物接触金属器械

　　八、孔间显色不均

　　液体蒸发‌

　　孵育时未贴封板膜导致边缘孔干燥

　　气泡干扰‌

　　加样时产生气泡影响反应界面

　　九、样本检测值异常

　　预处理不当‌

　　溶血、脂血或反复冻融破坏靶标

　　稀释错误‌

　　未预实验确定合适稀释倍数

　　十、酶标板花板

　　纤维蛋白残留‌

　　血清未充分凝固或离心不净

　　洗板冲击力不足‌

　　手工洗板时液体未垂直注入孔底

　　十一、读值漂移

　　终止后延迟‌

　　加终止液超过15分钟未读板

　　波长设置错误‌

　　酶标仪未调至TMB最佳吸收峰(450nm)

　　建议实验前严格检查试剂状态、校准仪器，并设置合理的质控对照。若问题持续，可联系试剂厂商获取技术支持。

　　注：以上资料仅供参考，具体请咨询技术老师或品牌供应商。

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