以下是ELISA试剂盒实验中常见问题及解决方案的总结，天津本生技术小编结合实验操作关键环节进行分类说明：

　　一、‌样本处理问题‌

　　溶血/脂血干扰‌

　　现象‌：背景值升高或结果异常。

　　解决‌：血液样本需静置1-2小时后离心(3000×g，15分钟)，避免剧烈震荡;脂血样本建议超速离心或过滤。

　　反复冻融影响‌

　　现象‌：靶蛋白降解导致信号减弱。

　　解决‌：样本分装保存(-20℃或-70℃)，冻融≤3次。

　　二、‌加样与孵育问题‌

　　加样误差‌

　　现象‌：复孔差异大(CV>15%)。

　　解决‌：使用校准后的移液器，垂直加样避免气泡;高浓度样本优先稀释。

　　孵育不充分‌

　　现象‌：信号弱或无信号。

　　解决‌：确保37℃孵育时间准确(误差±5分钟)，微孔板加盖防蒸发。

　　三、‌洗涤问题‌

　　洗板不净‌

　　现象‌：高背景或非特异性结合。

　　解决‌：手工洗板需注满每孔，静置1分钟后甩干;自动洗板机需定期维护喷头。

　　洗涤液残留‌

　　现象‌：孔底液体影响OD值。

　　解决‌：甩板后倒扣于吸水纸上轻拍。

　　四、‌显色与检测问题‌

　　显色异常‌

　　现象‌：显色过快(底物污染)或过慢(酶失活)。

　　解决‌：TMB避光保存，现配现用;终止后10分钟内读数。

　　标准曲线不佳‌

　　现象‌：R²<0.95或线性差。

　　解决‌：标准品复溶后涡旋混匀，避免冻干粉残留;建议双对数拟合曲线。

　　五、‌其他高频问题‌

　　“白板"现象‌

　　原因‌：酶标抗体失效或漏加。

　　解决‌：检查试剂有效期，按顺序添加酶标抗体。

　　边缘效应‌

　　原因‌：温育温度不均。

　　解决‌：孵育时避免叠放板条，确保热空气流通。

　　六、‌预防性措施‌

　　试剂管理‌：未使用板条需密封保存(含干燥剂)，避免受潮。

　　质控设置‌：每板需包含阴/阳性对照和空白孔。

　　设备校准‌：定期校验酶标仪波长(如450nm±2nm)和移液器精度。

　　注：若问题持续，建议联系试剂盒厂家提供标准操作视频或技术支持。

　　注：以上资料仅供参考，具体详情来咨询技术 老师或品牌供应商。

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