ELISA试剂盒的灵敏度该如何判定?

　　ELISA试剂盒的灵敏度判定需结合以下关键指标和方法综合评估：

　　一、灵敏度的定义与核心指标‌

　　检测限(LOD)‌

　　指能可靠检测到目标物的低浓度，计算公式为：

　　LOD = 空白信号均值(Sb) + 3 × 空白信号标准差(σ)‌ ‌。

　　实际应用中，试剂盒说明书常标注“灵敏度"即对应LOD(如10pg/mL)‌。

　　定量限(LOQ)‌

　　可准确定量的低浓度，计算公式为：

　　LOQ = Sb + 10 × σ‌ ‌。

　　通常要求信号变异系数(CV)≤20%，确保结果可重复‌。

　　二、判定方法‌

　　标准曲线验证‌

　　选择低浓度标准品(如LOD附近浓度)，重复检测3次，计算信号强度与背景噪声的比值(S/N≥3为合格)‌。

　　加标回收率测试‌

　　在样本中添加已知浓度的目标物，检测回收率应在80%-120%范围内‌。

　　示例：若添加50pg/mL标准品，测得浓度为45-55pg/mL则符合要求。

　　稀释线性实验‌

　　对样本进行梯度稀释，检测信号值与理论值的偏差应≤20%‌。

　　三、实验优化建议‌

　　样本处理‌：避免反复冻融，离心去除干扰物‌。

　　对照设置‌：同步检测空白对照(仅缓冲液)和阴性样本，确认无交叉反应‌。

　　数据分析‌：优先选择线性范围内(R²≥0.99)的数据点计算浓度‌。

　　四、常见误区‌

　　混淆“灵敏度"与“检测范围"：灵敏度是LOD，而检测范围是标准曲线的线性区间(如30-900pg/mL)‌。

　　忽略批间差异：板内变异系数应<5%，板间变异系数应<15%‌。

　　通过上述方法可系统评估试剂盒灵敏度，确保实验数据的可靠性。

　　注：以上资料仅供参考，如需进一步了解产品详情，可参考品牌供应商或技术老师。

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