ELISA双抗体夹心法有哪些常见问题?

　　以下是ELISA双抗体夹心法实验中常见问题的系统分析及解决方案，本生技术小编结合多来源信息整理：

　　一、样本相关异常‌

　　假阳性/高背景‌

　　原因‌：血液溶血或纤维蛋白未清除，血红蛋白干扰显色‌

　　对策‌：3000rpm离心15min，取上清检测，避免溶血样本‌

　　稀释线性异常‌

　　现象‌：样本孔OD值超出标准曲线范围(>2.0或<0.1)‌

　　调整‌：按10倍梯度稀释重测，确保OD值在0.1-1.5区间‌

　　二、操作技术问题‌

　　洗涤不充分‌

　　表现‌：整板均匀显色(花板)或复孔CV>20%‌

　　优化‌：洗板5次，每次拍板后更换吸水纸，避免交叉污染‌

　　孵育条件失控‌

　　温度‌：超过37℃导致非特异性结合增加(建议恒温箱校准)‌

　　时间‌：超过说明书建议时间(通常抗原孵育≤1小时)‌

　　三、试剂与设备问题‌

　　抗体配对不当‌

　　影响‌：钩状效应(高浓度样本假阴性)‌

　　验证‌：通过棋盘滴定确定最佳抗体浓度比‌

　　底物失效‌

　　判断‌：阳性对照孔显色浅或无色‌

　　处理‌：现配现用TMB，避光保存，避免金属离子污染‌

　　四、数据分析异常‌

　　标准曲线拟合不佳‌

　　指标‌：R²<0.99或低浓度点偏离‌

　　措施‌：检查标准品溶解是否充分，复孔重复性‌

　　灵敏度不足‌

　　标准‌：最高浓度孔OD值应>1.0‌

　　提升‌：延长封闭时间(2小时)或更换高亲和力抗体‌

　　注：以上资料仅供参考，如需进一步了解产品详情，可参考品牌供应商或技术老师。

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