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如何正确配制ELISA试剂盒中的稀释液?
ELISA试剂盒中稀释液的配制需根据实验需求选择合适类型(如标准品稀释液、样品稀释液或抗体稀释液),并严格遵循试剂盒说明书或以下通用方法:
一、稀释液类型与配制原则
标准品稀释液
用于梯度稀释标准品,通常含缓冲盐(如PBS)和稳定剂(如BSA、甘油),确保标准品浓度准确且稳定。
示例配方:0.1% BSA + PBS(pH 7.4)。
样品稀释液
用于降低样本基质干扰(如血清、血浆),常含封闭剂(如5%脱脂奶粉或1% BSA)。
示例配方:5%小牛血清 + PBS(pH 7.4)。
抗体稀释液
保护抗体活性,减少非特异性结合,需含缓冲液(如TBS)和稳定剂(如甘油)。
示例配方:0.1% Tween-20 + 1% BSA + PBS。
二、通用配制步骤
溶解与混匀
冻干标准品需短暂离心后,按说明书加入指定体积稀释液,室温静置10-30分钟溶解。
粉末试剂(如BSA)需溶解于缓冲液中,避免未溶颗粒影响实验。
梯度稀释
使用倍比稀释法(如1:2、1:4),每步充分混匀(吹打10次或涡旋5秒)。
稀释后短暂离心,确保管壁液体沉底。
现配现用
含酶标记物或生物素的工作液需临时配制,避免活性下降。
三、注意事项
水质要求:使用去离子水或双蒸水,避免自来水中的离子干扰。
pH匹配:稀释液pH需与试剂盒要求一致(如pH 7.4 PBS用于多数ELISA)。
分装保存:未用完的稀释液可分装后-20℃保存,避免反复冻融。
四、常见问题
背景高:可能因封闭剂不足或稀释液含杂质,建议更换高纯度BSA或脱脂奶粉。
信号弱:检查稀释液是否含蛋白酶抑制剂(如血清样本需添加)。
如需具体试剂盒的稀释液配方,请参考说明书或联系供应商。
注:仅供科研使用,以上资料供参考,如需具体产品说明请咨询技术老师或品牌供应商。
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