ELISA实验原理

　　ELISA(酶联免疫吸附试验)是一种基于抗原-抗体特异性结合的免疫检测技术，通过酶催化底物显色实现定性或定量分析‌。其核心原理包括：

　　固相包被‌：抗原或抗体通过物理吸附固定在微孔板表面‌。

　　免疫反应‌：待测样本与包被物结合，形成抗原-抗体复合物‌。

　　信号放大‌：酶标记的二抗或底物催化显色，通过酶标仪读取吸光度值‌。

　　主要ELISA类型及适用场景

　　类型‌ ‌          原理特点‌                                   典型应用‌

　　直接ELISA‌  抗原直接包被，酶标一抗检测    病毒颗粒、纯化蛋白定量‌

　　间接ELISA‌  酶标二抗放大信号，灵敏度高    抗体检测(如HIV、新冠IgG/IgM)‌

　　夹心ELISA‌  双抗体夹心结构，特异性强       胞因子(IL-6)、肿瘤标志物(CEA)‌

　　竞争ELISA‌  标记抗原与样本抗原竞争结合抗体 小分子检测(激素、药物)‌

　　关键试剂与仪器

　　试剂‌：

　　包被缓冲液‌(如碳酸盐缓冲液)‌

　　酶标抗体‌(HRP或AP标记)‌

　　显色底物‌(TMB或OPD)‌

　　终止液‌(如硫酸)‌

　　仪器‌：

　　酶标仪(检测吸光度)‌

　　移液器(精确加样)‌

　　洗板机(去除未结合物)‌

　　操作步骤(以夹心ELISA为例)

　　包被‌：捕获抗体固定于微孔板，4℃过夜‌。

　　封闭‌：加入BSA或脱脂牛奶封闭非特异性位点‌。

　　孵育‌：加入样本和检测抗体，37℃孵育1小时‌。

　　显色‌：加入TMB底物，避光反应15分钟‌。

　　终止‌：加入终止液，酶标仪读取450nm吸光度‌。

　　注意事项

　　样本处理‌：避免反复冻融，离心去除颗粒物‌。

　　洗涤‌：每次孵育后需洗涤，减少背景信号‌。

　　标准曲线‌：需设置梯度浓度标准品，确保线性范围‌。

　　注：以上资料仅供参考，具体产品信息请咨询技术老师或品牌供应商。

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