Elisa实验：ELISA标准曲线制作流程

　　一、数据准备

　　输入浓度与OD值‌

　　在Excel表格中录入标准品的浓度(X轴)和对应的OD值(Y轴)，双抗体夹心法需计算OD值减去空白对照(OD-blank)‌。

　　数据预处理‌

　　竞争法建议使用Logit-log或四参数拟合，双抗夹心法可选直线、二次曲线或四参数拟合‌。

　　二、曲线拟合

　　选择拟合模型‌

　　常用模型：直线回归(R²≥0.99)、四参数Logistic(适用于宽浓度范围)、二次曲线(OD值>2.0时更优)‌。

　　通过软件(如Curve Expert 1.3或ELISA Calc)自动拟合，优先选择R²值天津1的方程‌。

　　验证拟合效果‌

　　检查回归方程系数(如四参数方程中的a、b、c、d值)及R²值，确保曲线平滑无异常点‌。

　　三、计算样本浓度

　　反向推算‌

　　将待测样本的OD值代入拟合方程，计算浓度值(需乘以稀释倍数N)‌。

　　二次曲线可能产生双解，需舍弃偏离度大的结果‌。

　　结果输出‌

　　复制拟合方程和计算数据至报告，标注R²值及拟合方式‌。

　　四、注意事项

　　扣本底处理‌：若试剂盒要求，需先扣除空白孔OD值再拟合‌。

　　重复实验‌：标准曲线需每次实验独立制作，避免批次差异影响准确性‌。

　　五、扩展工具推荐

　　软件工具‌：Curve Expert 1.3(支持多项式拟合)‌、ELISA Calc(支持多种回归模型)‌。

　　注：仅供科研使用，以上资料供参考，如需具体产品说明请咨询技术老师或品牌供应商。

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