ELISA样本稀释：如何“稀释"出准确结果?

　　ELISA样本稀释操作指南

　　一、稀释核心原则

　　样本稀释后OD值应落在标准曲线最高值OD值的半量程内(如标准品最高OD=2.4时，目标OD≈1.2)，此时计算误差最小‌。高浓度样本(如IgG、TNFα)需预实验确定稀释倍数，避免钩状效应‌。

　　二、标准操作流程

　　梯度稀释法‌

　　大比例稀释(如200倍)分步进行：先10倍稀释，再基于此稀释20倍‌

　　使用校准移液器，单次取样量≥5μL，避免气泡残留‌

　　稀释液选择‌

　　含0.05% Tween-20的PBS降低背景，5%脱脂牛奶适合高基质样本‌

　　复杂样本(组织匀浆)需预处理：离心或超声裂解‌

　　三、常见问题处理

　　假阳性‌：类风湿因子干扰样本可加热灭活(100℃ 1分钟)

　　信号异常‌：溶血样本需弃用，EDTA浓度需<5 mM‌

　　基质干扰‌：血清样本建议4℃静置离心去除纤维蛋白‌

　　四、前沿技术应用

　　纳米标记技术‌：提升灵敏度，但需优化稳定性‌

　　自动化稀释系统‌：减少人为误差，适合高通量检测‌

　　通过规范操作和梯度稀释策略，可确保检测结果落在标准曲线线性范围内，显著提升数据可靠性‌。

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。 Elisa试剂盒

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