ELISA实验结果90%取决于它!样本处理全攻略

　　ELISA实验结果的可靠性高度依赖样本处理的规范性，以下是关键要点总结：

　　一、样本类型与处理原则

　　血清/血浆‌

　　血清需室温静置1-2小时或4℃过夜后，3000×g离心15-20分钟，避免溶血和反复冻融‌。

　　血浆需使用EDTA或肝素抗凝，采集后30分钟内离心，避免室温放置过久导致因子降解‌。

　　细胞培养上清‌

　　1000×g离心20分钟去除碎片，建议分装保存并避免冻融‌。若检测低丰度蛋白，可浓缩样本。

　　组织/细胞裂解液‌

　　组织需按1:9(w/v)加入含蛋白酶抑制剂的PBS匀浆，冰上超声或冻融裂解后5000×g离心‌。

　　贴壁细胞需胰酶消化后PBS洗涤，超声裂解时建议3×5秒(冰上操作)‌。

　　二、关键注意事项

　　避免假阳性‌：样本需严格无菌，防止细菌污染(含内源性HRP)或纤维蛋白原干扰‌。

　　防止假阴性‌：目标蛋白易降解时需添加蛋白酶抑制剂，避免使用含NaN3或高浓度EDTA的保存液‌。

　　标准化操作‌：离心参数、冻融次数需统一，不同批次样本处理条件需一致‌。

　　三、特殊样本处理

　　脑脊液/尿液‌：需5000-6000×g离心去除沉淀，分装后-80℃保存。

　　酸化样本‌：部分样本需用HCl中和后检测(如某些细胞因子)‌。

　　四、常见错误与优化

　　高背景‌：可能因封闭不充分或洗涤不净，建议使用5%脱脂牛奶+0.05% Tween-20封闭液‌。

　　重复性差‌：建议预实验确定样本稀释倍数，确保OD值在标准曲线线性范围内。

　　通过规范样本处理流程，可显著提升ELISA数据的准确性和重复性‌。

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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